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文章对2018-2020年我国部分地区的样品进行回溯性调查研究，从PRRSV抗体、核酸检测以及分子遗传变异3个方面进行了检测和分析，希望了解近期我国猪繁殖与呼吸综合征的流行病学变化情况，为该病的防控和区域净化提供数据支持。
1 PRRSV抗体检测
1.1 样品来源
样品来自于2018-2020年我国24个省份3525个不同规模猪场共计106924份血清样品。
1.2 检测方法
抗体检测采用ELISA方法，使用商品化试剂盒进行检测，详细操作步骤及结果判定按照试剂盒说明书进行。
1.3 分析指标
1.3.1 指标定义
阳性样品：检测结果为阳性的样品
阳性场：只要场内样品检出1例阳性样品，该场为阳性场
场阳性率：阳性场次数/被检场次数×100%
场内个体阳性率：被检场场内阳性样品总数/被检场检测样品总数×100%
样品阳性率：所有被检样品检测结果为阳性数量/检测份数×100%
1.3.2 统计方法
根据被检猪场规模的差异，将被检猪场分成规模养殖场（存栏≥3000头）和散户（存栏＜3000头），用Epi info7软件计算不同组别的OR（Odds Ratio，比值比）、95%CI（Confifidence interval，置信区间）和P值，分析各组间的抗体及核酸阳性率差异。
1.3.3 空间分布
用Power BI软件制作所有被检样品来源地区在我国的分布情况。
1.4 抗体检测结果及分析
2018-2020年PRRS抗体不同地区场内及个体抗体平均阳性率分别为88.9%与70.6%。从不同年份看，2018-2020年场阳性率分别为95%、92%、86%，样品阳性率分别为79%、77%、64%，均呈现下降趋势(见图1）。
与前两年相比，2020年场内个体阳性率中位数较低，为78.57%，但是分布更为离散，提示不同场点的场内个体抗体阳性率差异较大（见图2）。
从不同季度看，PRRSV抗体的样品阳性率分布未呈现出季节性的特征，但自2020年第一季度起呈持续降低趋势（见图3）。
从不同区域看，2018年、2019年各地区场阳性率、样品阳性率差异不大；2020年，场阳性率华中区最高（88.3%）、华南区最低（58.7%），样品阳性率西北区最高（75%）、西南区最低（24%）（见图4）。
从不同养殖场类型来看，规模场阳性率88.1%，散户场阳性率89.2%，经统计学检验，规模场和散户的场阳性率未发现显著差异（见表1）。
2 PRRSV核酸检测
2.1 样品来源
样品来自于2018-2020年我国27个省份3981个不同规模猪场（场次）的23708份样品，样品类型为组织、猪全血、精液、唾液、精液等。
2.2 检测方法及指标
核酸检测采用RT-PCR和qPCR方法，使用商品化试剂盒进行检测，详细操作步骤及结果判定按照试剂盒说明书进行。
统计分析指标同1.3。
2.3 PRSSV核酸检测结果及分析
2018年到2020年，PRRSV核酸的场阳性率逐年降低，分别为45.4%、27.8%、22.9%；样品阳性率也呈现降低趋势，2018年最高，为22.1%，2019年、2020年分别为11.8%和13.9%，较2018年有较大幅度降低（见图5）。
从不同季度看，除2018年外，其余年份第4季度样品阳性率较高（见图6）。
从不同区域看（见图7），不同地区场阳性率、样品阳性率差异较大；2020年，场阳性率东北区最高（30%）、华南区最低（6.2%）；样品阳性率东北区最高（21.7%），华南区（1.8%）、西南区最低（1.5%）。
从不同养殖场类型看，规模场样品阳性率为14.6%，散户样品阳性率为13.8%，经统计学检验，不同养殖类型场点的样品阳性率存在一定差异（见表2）。
3 PRRSV分子生物学分析
共对336份样品的PCR扩增产物进行测序，获得73条基因序列，将ORF5与NSP2片段序列通过DNASTAR软件的MegAlign功能与GenBank上已发表的国内外流行PRRSV参考毒株进行序列比对，构建遗传进化树，进行同源性分析。
经测序分析（见表3、图8），PRRSV NADC30-like毒株占比53%，PRRSV高致病型毒株占比22%，PRRSV经典型毒株占比10%，PRRSV欧洲型毒株占比4%，PRRSV重组毒株占比11%，重组毒株主要来源于华南地区。
从毒株类型来看（见表4、图9），2019年和2020年毒株类型呈现出多样性，主要为NADC30-like株，其次为高致病型毒株，重组毒株、经典型毒株、欧洲型毒株并存。2018年因数据来源局限性，分离获得毒株主要为NADC30-like。
PRRSV ORF5基因进化树分析：所获ORF5基因序列43条，其中，有40株为美洲型，3株欧洲型。其中，以HENAN-XINX、NADC30为代表株的lineage1的14株、以CH-1a、JXA1为代表株的lineage8（sublineage8.7）的15株、lineage5（sublineage5.1）5株，其代表株为VR2332和BJ-4，QYYZ为代表的lineage3的有6株。LV毒株为代表的genotypeⅠ有3株。
PRRSV NSP2基因进化树分析：所获NSP2基因序列30条，与HUN4、JXA1和TJM毒株等国内流行毒株属于同一进化分支且遗传关系较近，均属于PRRSV美洲Ⅳ型基因亚型，其中与TJM毒株遗传进化关系最为接近，与欧洲型代表毒株遗传进化关系较远。
通过核酸检测结果与分子生物学分析显示，2018-2020年我国部分地区猪群感染PRRSV较为普遍。主要是美洲型毒株lineage（NADC30-like）与lineage8（HP-PRRSV）。感染猪群存在不同谱系PRRSV毒株混合感染，且呈现不同程度的变异。
4 小结
本调查结果显示：1）对106924份猪血清PRRSV抗体检测结果进行分析，2018年样品阳性率为79.0%，2019年为76.8%，2020年为64.9%，整体呈现下降趋势。2）对23708份样品PRRSV核酸检测结果进行分析，每年第4季度样品阳性率均高于当前前3季度，呈现出季节性特征。3）基因序列分析显示，PRRSV流行毒株主要为美洲型毒株lineage1（NADC30-like）与lineage8（HP-PRRSV)。感染猪群存在不同谱系PRRSV毒株混合感染，且呈现不同程度的变异。43例样品的ORF5基因序列与美洲型代表毒株同源达78.8%~100.0%，其中与LV和LENA毒株同源性低，为51.8%、21.7%，与其他各型代表毒株的同源性均在78.8%以上；30例样品NSP2基因序列与美洲型代表毒株同源达78.5%~99.4%，其中与JXA1毒株同源性最高，达99.4%，而与其他各型代表毒株的同源性均在88.4%以下。
5 讨论
从调查情况来看，PRRS在我国仍然呈现广泛流行，防控形势总体平稳，但不同地区呈现一定差异，不同猪场之间的感染情况差异较大。该病临床上主要表现为繁殖障碍、呼吸道疾病及猪群继发感染。对于PRRS的诊断，可以通过流行病学特点以及临床症状做出初步诊断，但是由于亚临床症状以及继发感染普遍存在，该病的鉴别诊断需要通过实验室检测后方可确定。PRRSV属于RNA病毒，在感染压力和外环境影响下，其基因序列的变异和重组，导致毒株种类众多，不同毒株的致病力不同，临床情况复杂，防控难度加大。因此，对于PRRSV毒株类型的变化及其病原生态学，需要持续监测其演变情况。对于养殖场来说，通过对猪场毒株的基因类型进行测序分析，结合整体情况制定合适的防控方案，做好生物安全措施，适时开展净化，减少因免疫抑制病引发的继发性细菌感染，是有效防控PRRS，降低猪场损失的必要措施。
5.1 PRRSV抗体检测阳性率持续降低
我国PRRS的抗体阳性率普遍较高，这与疫苗的普遍使用有直接关系。但是，2018-2020年度PRRSV抗体呈整体下降趋势，特别是2020年，从第1季度到第4季度，抗体阳性率持续下降。自从2018年非洲猪瘟在我国暴发之后，猪场为尽量降低猪群应激，采取了减少疫苗使用种类及频次的措施，生物安全措施较好的部分种猪场开始进行PRRS净化，对阳性猪只进行了检测、淘汰等措施，这可能是导致抗体阳性率持续降低的原因之一。东北、华东以及西北3个地区PRRSV的抗体阳性率相差不大，均在70%以上；而华中、华北地区PRRSV抗体阳性率次之，在61%~69%之间，而西南地区PRRSV抗体阳性率最低，为26.3%。西南地区PRRSV抗体阳性率最低的一个原因是缺失2018年的样品数据，导致其平均抗体阳性率较低，因此该数据结果与其他区域不具备可比性。
5.2 与非洲猪瘟在我国发生前相比，PRRSV核酸阳性率呈现明显的降低趋势
2018-2020年共收集到7个区域27个省份不同规模猪场样品进行核酸检测，统计分析显示，PRRSV核酸阳性率整体呈现明显的下降趋势，场阳性率由2018年的45.4%下降到2020年的22.9%，样品阳性率由2018年的22.1%下降到2020年的13.9%。与2018年非洲猪瘟在我国发生之前相比，PRRS流行与发生比较平稳。随着生物安全管理被纳入猪场的核心工作，猪场生物安全体系不断完善，车辆洗消、人员管控、引入猪只隔离检测等措施的实施，在很大程度上降低了病毒性疫病对养殖环境的污染，也大幅度降低了PRRSV的污染面，猪场感染率呈现明显的下降态势，在PRRS防控方面显现出了积极成效。
从时间特征来看，第4季度核酸阳性率高于前3季度。因冬春季节气候原因，在猪场管理相对薄弱的情况下容易发生呼吸道、消化道疾病，且PRRSV对热和干燥敏感，在热和干燥的条件下能够迅速失活，适应潮湿和阴冷环境的理化特性，造成PRRS流行与季节有一定的相关，但由于此次调查数据仅为2018-2020年我国部分地区收集的样品，部分地区和年份样品数量较少，不能完全代表全国疫病流行情况，仅作为临床疫病防控参考，是否有显著差异仍需持续监测才可以进一步证实。
5.3 PRRSV遗传变异情况复杂，多种类型毒株共存，主要流行毒株为NADC30-like
调查结果显示，目前我国猪群主要流行的仍然为美洲型毒株lineage1（NADC30-like），高致病型毒株、重组毒株、经典型毒株、欧洲型毒株等多种毒株类型共存。近年来，PRRSV新亚群逐步增多且出现毒株重组现象，本次调查结果发现的毒株中重组毒株占比为11%。虽然目前PRRSV基因组变异与致病性增强或减弱之间的关系仍不明确，但常常由于新毒株的传入而造成猪场PRRS不稳定，这些重组不仅导致新的PRRSV基因型出现，使病原鉴定的复杂性提高，而且一定程度上影响了PRRSV的毒力，同时也使该类毒株的致病性发生改变，给防控带来很大挑战。此外，自2016年新毒株NADC34-like毒株在美国首次报道后，该毒株逐渐在世界范围内流行开来，2017年，NADC34-like PRRSV在我国首次报道，NADC34-like毒株属于Sublineage1.5的一员，已在我国多个地方取代高致病性PRRSV（HP-PRRSV）成为主要的流行株，对国内也存在严重的威胁，因此，我们必须对NADC34-like毒株加强监测力度，做好防控措施。同时近期美国猪群主要流行毒株PRRSV 1-4-4变异株Lineage 1C毒株，也不容忽视。通过不断跟踪毒株的变异情况，分析毒株的变异方向，可提早预测PRRS的流行趋势，减少其造成的经济损失。
通过2018-2020年中国多地区PRRS流行病学回溯性调查，对我国部分地区的样品PRRSV抗体、核酸检测以及分子遗传变异3个方面进行检测和分析，了解了PRRS在我国流行变化情况，为PRRS防控和下一步区域净化提供了一定的数据参考。
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