中国动物疫病预防控制中心联合中国动物卫生与流行病学中心，在2020年1月6日，举办了“全国非洲猪瘟防疫和复养技术大讲堂”，中国动物卫生与流行病学首席科学家李晓成老师分享了《感染非洲猪瘟养殖场复养指南》的内容。
在大讲堂中，李晓成老师提到，在整个非洲猪瘟的防控过程当中有两个关键技术，第1个关键技术是消毒，第2个关键技术是实验室检测。在这里主要跟大家分享李晓成老师关于实验室检测的两个内容：
1. 影响实验室准确检测的7个因素
2. 实验室检测一定要明确检测目的
在非洲猪瘟的整个防控工作当中，不管是早期预警，早期发现，疑似病确诊，还是环境评估都离不开实验室检测，尤其是随着非洲猪瘟在我们国家的进一步发展，在临床上，非洲猪瘟的临床症状多样性越来越明显，我们通过临床观察很难确诊疾病，所以非瘟的诊断和防控都必须依靠实验室检测技术，对此我们需要对影响实验室诊断的一些因素必须有个清醒的认识。
影响实验室准确检测的因素
01 样品的代表性...
李晓成老师强调，如果采的唾液样本，仍用生理盐水和PBS缓冲液，会很难保证样品的可靠性，必须加一些有效的酶抑制剂，才能有效保持唾液样本的活性，建议选用特定的保存液用于唾液样品的采集及保存。
02 样品的运输条件及保存时间
有人针对样品的保存时间做过很多实验，结果发现保存7天之内进行临床检测是比较有意义的。
03 样品处理
在我们现有的已经注册和批准使用的试剂盒当中，一般情况下不包含核酸提取试剂盒，但是有人做过很多实验，不同公司提供的核酸提取试剂盒差异非常大，提取的质量差异也很大，即使是病毒含量很高的一些样品，最终结果也能出现一些差异性结果。
04 PCR试剂盒...
现阶段使用最多的是荧光定量PCR试剂盒，但随着非瘟的进一步发展，防控能力不断提升，越来越多的试剂盒会出现在我们大家的手中，如胶体金试剂盒，试纸条，免提试剂盒，还有其他一些试剂盒。每一种试剂盒的使用范围，样品种类，灵敏度，最低检测限等它是不一致的。
李晓成老师提醒我们一定要注意试剂盒的最低检测限，需要清楚知道我们使用试剂盒的检测目的，有目的性的选择试剂盒。
05 实验室操作人员
实验室操作人员在整个检测过程当中是非常重要的一个环节。因为非瘟的缘故，很多企业或者猪场新建了实验室，有些实验室人员的素质非常高，但是有些实验室的人员素质还是不尽如人意，需要进行培训。
06 实验室环境
实验室环境是容易造成污染的，所以说实验室环境应该要想办法尽可能去清除污染。
07 PCR仪器...
有一个大家以前没有关注到的地方-PCR仪器，原先我们认为所有的试剂盒，所有的PCR仪器都可以适应。但是经过很多精细化的检测壁垒实验以后，有很多试剂盒对有些PCR仪器是不适用的，所以说在PCR仪器的选择方面，我们需要做一定的工作。
实验室检测一定要明确检测目的
检测目的会直接要求对样品种类和混样比例做出明确的规定
目的：监测预警
-口腔和鼻腔拭子是首选样品，且混样比例不能过高，一般规定不能超过10个样。
为什么？因为猪在自然感染情况下，病毒最早出现在扁桃体，大概在3-6天，口腔和鼻腔出现这个病毒，而且在早期口腔和鼻腔当中的病毒含量不会太高，所以为了提高灵敏度，提高准确性，混样比例不宜过高。
目的：准确诊断
-口鼻拭子和抗凝血是最合适的样本，样本的混样比例可以加大。
准确诊断主要是用于临床，当临床上出现临床症状（疑似病例）时，血液、口腔、鼻腔、组织当中病毒含量极其高，用哪一个组织哪一个样本来检测都没有任何问题了，而且有人做过实验，即使样品稀释到1:2048，仍然能够检测到病原。
目的：评估环境
-环境评估判断舆情风险或进行复养最核心的一个技术环节
在清洗和消毒之后环境样品中的病毒含量一般都极低，如果混样比例高的话会影响检测结果，李晓成老师建议一般情况下不主张超过10个样品的混合，一般是限定在10个样品以内。
检测目的可以决定提取试剂盒和PCR试剂盒的选择
监测预警及环境评估都要求核酸提取试剂盒、PCR检测试剂盒里的灵敏度要高，而准确诊断对试剂盒的选择无需那么严格，一般试剂盒基本上都能满足要求，比方说一些灵敏度不高的试剂盒，一些免提取的试剂盒，我们直接做抗凝血的检测，都没有什么问题。
可能最近一段时间，有这样一种现象，买PCR 仪器赠送试剂盒，有些甚至用很灵敏的一种发光试剂盒，但这种试剂盒灵敏度很高，但是可靠性很差。可靠性很差的最主要表现是什么？重复性很差，李晓成老师不主张用这种试剂盒，他建议首先选取已经正式注册，有农业农村部发布文号的试剂盒。
检测结果的解读
试剂盒成立的条件是阴阳性对照，必须出正确的结果！检测样品出阳性结果，只能说是核酸阳性，只代表病原的感染痕迹，并不能说明它具有感染性或者我们所说的活性，不能判断病原的活性。但是检测核酸阴性结果，最起码能说明我们对环境的清理、清洗、消毒起到了一定作用。如果说环境当中仍然有核酸阳性，尽管我们不能判断它是否有活性，但是从另外一个方面反映，清理、清洗、消毒工作是不彻底的。
