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最近朋友圈在大量转载《养殖场非洲猪瘟病毒弱毒株的防控技术指南》这篇文章，针对文中弱毒株的检测方法但又不限于弱毒株的检测，谈一些自己的认知与实践总结，希望更多的猪场在非瘟检测的过程中避免被忽悠少走弯路。
非瘟的病原到底该怎么检测？市面上非瘟检测试剂盒到底该如何合理使用？
检测试剂盒设计的依据基本上都是来源以下基本构架和判定标准：关于缺失的基因是双基因（MGF和CD2v），也是所谓的七基因（MGF505-1R, MGF505-2R, MGF505-3R, MGF360-12L, MGF360-13L, MGF360-14L, CD2v），只不过这个表述把MGF基因家族扩充了构建6组毒株：包括缺失 MGF505-1R, MGF505-2R, MGF505-3R, MGF360-12L, MGF360-13L, MGF360-14L, CD2v, 9GL, DP148R, and UK, 最后筛选出HLJ/18-6GD、HLJ/18-7GD、HLJ/18-9GL&UK-del三组完全致弱的毒株。
单测P72：P72阳性只能说明非瘟阳性，是否野毒需要测序。是否疫苗毒需要初步鉴别诊断，比如使用P72+CD2v+MGF和P72+EGFP+mCherry，即使初步鉴别诊断是缺失疫苗毒，也需要进一步测序评估是否有在疫苗毒的基础上存在自然变异缺失。
P72+“所谓的”内部阳性对照：P72阳性只能说明非瘟阳性；“所谓的”内部阳性对照其实真正检测的是哺乳动物的β-actin基因，并不单纯测猪的基因，是为了避免假阴性，本质上是规避PCR反应抑制物的存在，就连第二通道中阴性对照都会有Ct值。
P72+真正的猪内源性基因：P72阳性只能说明非瘟阳性；真正的猪内源性基因测的只是猪的内源性基因，确定样品是否与猪相关。
P72+CD2v+MGF：P72阳性只能说明非瘟阳性，CD2v和MGF的检测是为了评估是否存在对应基因缺失，是初步判定单缺还是双缺的依据。
P72+EGFP+mCherry：是在P72+CD2v+MGF检测的基础上确定缺失的疫苗毒，进一步验证疫苗毒。
文中的P72+X64R+MGF360-14L检测应该也是为了疫苗毒的验证，但是个人感觉有不解的地方，疫苗毒的基因缺失确实有MGF360-14L（七基因缺失MGF505-1R, MGF505-2R, MGF505-3R, MGF360-12L, MGF360-13L, MGF360-14L, CD2v），但是X64R是Ⅰ型毒株自然缺失的片段（见下面的测序图），疫苗缺失+Ⅰ型毒株自然缺失这样的一个组合何解？
总结：对于大部分的检测使用P72单一检测即可，根据自己的出发点有所选择的使用内参，P72+CD2v+MGF和P72+EGFP+mCherry能做初步的疫苗毒鉴别诊断，需要了解毒株的真实情况，比如：是否是真正的野毒，是Ⅰ型还是ⅠⅠ型，是单一感染还是混合感染，是野毒自然缺失还是疫苗毒的基础上变异缺失等等，需要做高通量测序。
