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猪蓝耳病在我国的流行情况是怎么样的 ?PRRSV检测方法有哪些?(二)

哈药疫苗 2022-11-10

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猪繁殖与呼吸综合征俗称“蓝耳病”,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)所引起的猪的病毒性传染病。生猪感染PRRSV 后,对妊娠时期的母猪造成流产、死胎、早产、木乃伊胎等显著临床症状,对仔猪造成成活率大幅下降等临床症状,各年龄生猪均可发生呼吸道症状等。

2 血清学诊断

 

血清学方法因其容易操作、灵敏性特异性高,广泛应用于 PRRS 的实验室检测。免疫过氧化物酶单层试验(immunoperoxidase monolayel assay,IPMA)比较常见,酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assays,EILSA)和间接免疫荧光试验(IFA)的应用比较普遍,血清中和试验(SNT)也是一种重要的检测技术手段,其中 IPMA 和 ELSIA是OIE推荐的 PRRS 诊断和检测的主要方法。

 

血清诊断

 

2.1免疫过氧化物酶单层试验( IPMA)

 

IPMA 是目前欧洲最常用的 PRRS 抗体检测方法,是由荷兰中央兽医研究院建立的。该方法敏感性和特异性均较好,据相关资料,应用该方法能从感染 PRRSV 6天后的生猪血清中检测到 PRRS 抗体。IPMA也有一些弊端,如试验判定时检测结果主观性较强、尤其不利于自动化操作、容易产生假阳性及假阴性的结果等,因而不适于猪场的大规模 PRRS感染普查。

 

2.2血清中和试验(SN)

 

血清中和试验(Serum neutralization test,简称 SNT)使用 Marc-145 细胞,在96孔微量板上进行检测 PRRSV抗体,其特异性较好,但不如 IPMA、IFA和 ELISA敏感,且由于中和抗体在猪血清中出现较迟,不适合PRRSV的早期诊断,目前仅限于实验室研究及应用。

 

2.3间接荧光抗体试验(IFA)

 

美国农业部国家兽医实验室根据美国 PRRS 的流行情况及特点,建立了间接荧光抗体试验,检测 PRRSV 抗体,截至目前,仍在美国进出境生猪 PRRS 检疫工作中广泛应用。该方法能于PRRSV感染6天后检测出 PRRS 抗体。其敏感性和特异性与 IPMA相似,但该检测试验与 IPMA类似,需要在 PAMs、CL-2621和 MARC-145的单层细胞上进行,需病毒分离、细胞培养,并需要使用荧光显微镜主要依赖肉眼观察进行结果判定,检测结果具有很大的主观性。

 

2.4酶联免疫吸附试验(ELISA)

 

ELISA 是目前我国出入境生猪 PRRS 检疫工作中最常用的检测方法之一,也是全球PRRSV监测和诊断的常用方法。该方法主要用于检测 PRRSV 抗原及抗体,因其利用免疫学知识,通过单克隆抗体、多克隆抗体技术,敏感性高、特异性强、操作简单、可规模化检测、并可快速出具检测结果等优点,适用于期限短任务固定的大批量血清样品检测,尤其适合作为出入境生猪的隔离期 PRRS 检疫方法。现在常用的 ELISA 试剂盒通常是利用竞争ELISA、间接 ELISA 和阻断 ELISA的原理,特异性和敏感性均接近 100%。有研究人员在间接 ELISA法的基础上改进阻断ELISA方法,并应用于PRRSV的血清学检测,取得了较好的效果。

 

2.5乳胶凝集试验(LAT)

 

LAT检测目标是 PRRS抗体。其原理是利用纯化的 PRRSV重组蛋白致敏乳胶制作乳胶抗原。该方法特异性好,且操作简便、能实现快速检测,敏感性高、价格低廉,方便现场检测,是适合基层兽医单位 PRRSV 血清抗体检测的方法。

 

2.6胶体金技术

 

应用胶体金技术来检测 PRRSV,国内外有很多研究。有研究学者提纯兔抗 PRRSV的IgG 后用胶体金标记,并以此为基础建立了以胶体金为标记物、微孔滤膜为固相载体的一种检测技术,斑点免疫渗滤法 (DIGFA),并通过特异性阻断试验进行验证,结合交叉试验的结果,证明该检测方法具有较高的特异性。

 

2.4酶联免疫吸附试验(ELISA)

 

ELISA 是目前我国出入境生猪 PRRS 检疫工作中最常用的检测方法之一,也是全球PRRSV监测和诊断的常用方法。该方法主要用于检测 PRRSV 抗原及抗体,因其利用免疫学知识,通过单克隆抗体、多克隆抗体技术,敏感性高、特异性强、操作简单、可规模化检测、并可快速出具检测结果等优点,适用于期限短任务固定的大批量血清样品检测,尤其适合作为出入境生猪的隔离期 PRRS 检疫方法。现在常用的 ELISA 试剂盒通常是利用竞争ELISA、间接 ELISA 和阻断 ELISA的原理,特异性和敏感性均接近 100%。有研究人员在间接 ELISA法的基础上改进阻断ELISA方法,并应用于PRRSV的血清学检测,取得了较好的效果。

 

2.5乳胶凝集试验(LAT)

 

LAT检测目标是 PRRS抗体。其原理是利用纯化的 PRRSV重组蛋白致敏乳胶制作乳胶抗原。该方法特异性好,且操作简便、能实现快速检测,敏感性高、价格低廉,方便现场检测,是适合基层兽医单位 PRRSV 血清抗体检测的方法。

 

检测

 

2.6胶体金技术

 

应用胶体金技术来检测 PRRSV,国内外有很多研究。有研究学者提纯兔抗 PRRSV的IgG 后用胶体金标记,并以此为基础建立了以胶体金为标记物、微孔滤膜为固相载体的一种检测技术,斑点免疫渗滤法 (DIGFA),并通过特异性阻断试验进行验证,结合交叉试验的结果,证明该检测方法具有较高的特异性。

 

2.7单克隆抗体技术

 

单克隆抗体具有特异性、多样性和定向性的特点,在临床诊断和治疗中应用广泛。筛选PRRSV 单克隆抗体一度成为研究热点。很多学者应用不同型、不同来源的 PRRSV 毒株筛选单克隆抗体,用来鉴定毒株的抗原表位。但大量研究报道表明,其与 PRRSV 结构蛋白间的反应特性有所差异,其抗体与毒株的反应情况也不一致。其中,有的单抗能与所有型的PRRSV 毒株反应,而有的则只与欧、美洲型 PRRSV 毒株中某个型发生免疫反应。目前,经筛选的反应性较好的单抗已经在不同来源 PRRSV 临床分离株的诊断中得以应用。(转载节选自  杨春华 《PRRSV 监测技术平台的建立及其在疫情预警系统中的初步应用》 河南农业大学 博士论文)

 

(未完待续)


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