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猪丹毒是一个古老的疾病，140年前Loeffler确认其病原为丹毒丝菌，因病变典型又称“钻石皮肤”病[1,2]。丹毒丝菌对青霉素类如阿莫西林、红霉素类等药物敏感，疫苗可以有效预防，但该病依然每隔一段时间流行一次。2010年后我国猪丹毒病例明显增多，2015年前后形成一波发病高峰，感染导致母猪、中大肥猪急性死亡，给猪场造成不小的损失[1]。因临床症状相似，非洲猪瘟疫情期间也造成相当比例的误诊。
丹毒丝菌在自然界广泛分布，可感染哺乳类、啮齿类、鱼类、两栖类、昆虫、鸟类等多种动物，是典型的自然疫源性疾病。30%-50%的外观健康猪的扁桃体、淋巴组织内潜伏有猪红斑丹毒丝菌，高热、高湿等应激条件下发病。丹毒丝菌有4个种、28个血清型，对猪致病的主要为血清1型和血清2型红斑丹毒丝菌，两型菌株有相同的表面保护蛋白SpaA，交叉保护良好，我国当前流行血清型为1a型[1]。
猪流行性腹泻、伪狂犬等病毒相继出现变异株，猪丹毒再流行使人们怀疑丹毒出现了变异和血清型变化；养殖规模扩大、免疫管理提升，对丹毒控制方案和免疫效果的评估需求也高涨。同时猪丹毒的误诊时有发生，本文简要汇总了一些猪丹毒检测评估的工具，帮助猪场及时诊断，“早、快、严、小”处理，降低临床损失。
01 临床诊断
猪丹毒的临床表现主要有三种：1）急性发病和死亡，可见发热、昏睡、精神沉郁、不喜动和钻石皮肤病，孕猪流产；2）亚急性与急性症状类似但轻微，可见种猪不孕不育、外阴有分泌物、木乃伊（胎）增多、产仔少；3）慢性由急性和亚急性耐过后表现，可见关节炎致跛行、心内膜炎致心脏功能不全甚至猝死、生长迟缓等[3]。高温高湿季需警惕猪丹毒引起的大猪、母猪突然死亡。
02 实验室诊断
① 细菌分离
细菌分离是常规的实验室操作，也是生化鉴定、血清分型等深入研究所必需。现在有商品化的培养基供应，丹毒丝菌是一类不能运动、无芽孢、不耐酸、细长的革兰氏阳性杆菌，37℃24小时生长即可见菌落。病料直接分离细菌效率低，猪只接受药物治疗会有干扰，先用营养肉汤富集可将分离率提升约10倍[3]。培养成功的细菌做革兰氏染色，显微镜检可见典型形态的杆菌。
② 免疫组化
当牧场对猪群采取了药物干预措施，细菌分离失败时，可对病料做免疫组化。如病变的皮肤组织，难以分离细菌，免疫组化可帮助确诊[3]
图1.丹毒感染猪只皮肤组织的免疫组化[3]
③ 聚合酶链式反应PCR检测
普通的PCR检测需要电泳，实时荧光定量PCR技术除了省去电泳时间还可在一个反应体系进行多重病原检测，优势明显；LAMP-PCR技术则可将实验室检测移步到发病现场，经济实用[3]。
活体尤其口腔液采样用于抗原、抗体的检测已经实现，可以为猪丹毒的免疫评估提供更多信息。以栏为单位，用棉绳收集口腔液，在攻毒后第二天实时荧光定量PCR检出率可达100%，而同样的口腔液细菌分离率只有23.3%[2]。
④ 血清学检测
纯化的细菌，可做血清型鉴定。基础原理是琼扩实验，中心孔加入纯化的细菌，周围孔加入各型血清，出现免疫沉淀线为阳性，但目前国内还没有全面的血清盘，而且该方法耗时至少10天，并不适应临床需求。若生产实践中确有疫苗血清型选择需求,可采用PCR检测细菌表面保护蛋白的方式指导选择。
图2.血清分型实验
血清抗体检测有助于评估猪丹毒疫苗效果、判断感染状态，已有实验室自研和商业化的ELISA试剂盒可用。实验室自研的试剂盒，采用SpaA蛋白N端415个氨基酸制备的重组抗原包被，相比商业试剂盒有更高的灵敏度。检测22份阳性血清，自研试剂盒阳性率达100%；商业化的未知包被抗原背景的Ingenasa和Civtest试剂盒阳性率分别为63.6%和81.8%[4]。新近发展的荧光微珠免疫检测灵敏度更高，结合唾液采样在感染后4天即可检测到猪丹毒IgM抗体，IgG抗体感染后5天才能检测到[4,5] 。这种微珠检测类似于间接ELISA，将抗原包被在微珠而非ELISA板上，可做类似多重PCR的检测，一个体系可检测多种疾病的抗体[2]。
⑤ 脉冲场凝胶电泳
脉冲场凝胶电泳技术是对细菌基因组进行预处理，然后将大量田间分离株进行更细的分子分型[3]，主要应用于学术研究，在此不再赘述。
由于检测工具匮乏，国内对猪丹毒的诊断更多地依赖临床经验，难免造成误诊，贻误治疗。近年来的猪丹毒主要发生于每年的高温高湿季节，采取常规免疫是控制该病的主要手段，这已成为广大规模猪场的共识。但了解猪丹毒在猪群中的传播规律、评估疫苗的免疫效果、制定科学的控制方案都有赖于科学高效的检测手段。尤其是血清学检测、活体如唾液采样等技术的应用使大规模的调查评估成为可能，国内的科研单位也做了相应的技术储备，相关的研究和探索仍在进行之中。
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