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猪腹泻是养猪场里上常见的疾病之一，尤其对仔猪，严重时会导致哺乳仔猪大量死亡或生长发育迟缓等问题，造成猪场的巨大经济损失。猪腹泻常见致病因素有病毒性因素、细菌性因素、寄生虫因素、营养搭配不当等因素。近年来，危害最严重的还是以猪病毒性腹泻为主，主要包括猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪德尔塔冠状病毒和轮状病毒。在临床上，猪流行性腹泻和猪传染性胃肠炎与猪轮状病毒病的症状十分相似，导致诊断失误、治疗手段错误，难以短时间控制病情，影响整体防控效果。本文探讨疾病的病原特征、临诊症状、病理变化、实验室鉴别诊断，为养殖者提供建议。
1 猪流行性腹泻病毒
1.1 病原学
猪流行性腹泻病毒（PEDV）属于冠状病毒科，α冠状病毒属，病毒直径约95～190 nm，是一种囊膜病毒，囊膜外存在纤突，类似皇冠。病毒在低温环境中可以长期存活，粪便中病毒最长可存活9个月。病毒接触乙醚、氯仿等会迅速失活，如氢氧化钠、过氧化物类常规消毒剂也能有效杀灭病毒。
1.2 流行病学
猪流行性腹泻在我国猪场中十分常见，在我国动物疫病中发病数量常年居于首位。病猪是传染病的主要来源，它们的粪便、唾液、鼻涕、乳汁等分泌物会污染猪圈环境，从而使其他猪只受到感染，此外，它们还可能通过呼吸道或胎盘等垂直传播，从而对猪圈环境、用具、饮水、饲料等造成严重的破坏。PEDV可以感染各品种日龄猪，仔猪表现为发病急、病程短、传播迅速，7日龄内哺乳仔猪死亡率高达100%。育肥成年猪多数表现为一过性腹泻，死亡率不高，但会导致小肠绒毛损伤，营养吸收功能严重不足，免疫力随之降低，死亡率上升。
1.3 临床症状和病理变化
哺乳仔猪潜伏期短，24～48 h内即可发病，育肥猪潜伏期延长至5～8 d。发病仔猪的死亡率很高，其表现为明显的症状，如恶心、呕吐和水样腹泻。它们排泄的粪便带有刺鼻的气味，颜色为黄白。此外，还会排泄未完全吸收的乳块，仔猪的脱水情况非常严重。7日龄的仔猪通常会在3 d后死亡，成年猪仅表现为一过性腹泻，很快痊愈。剖检死亡仔猪，病理变化为胃部存在未完全吸收的乳块，胃黏膜出现了严重的出血，肠黏膜脱落，肠绒毛缩短，排泄物呈现浅黄色，肠道黏膜充满了液体，淋巴结肿胀。
2 猪传染性胃肠炎病毒
2.1 病原学
猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）能够导致猪传染性胃肠炎，属于冠状病毒科，冠状病毒属。病毒大小介于80～120 nm之间，病毒有囊膜，囊膜外有纤毛。TGEV在冷冻条件下非常稳定，可以长期存活；但在高温环境下状态不佳，50℃以上加热15 min就能灭活该病毒。因有囊膜保护，猪传染性胃肠炎病毒对消毒剂存在抵抗力，但对乙醚、氯仿等比较敏感。
2.2 流行病学
该病的传播源较多，病猪是最重要的传播源头，病毒可以在病猪的粪便、呕吐物等排泄物内长期存活，这些排泄物有更大的机会污染饲料、水源、养殖工具等，导致间接或直接传播。各个生长阶段的猪对该病毒均易感，7日龄以内的新生仔猪患病率极高。猪传染性胃肠炎四季均发病不呈现季节性，但在许多大型养殖场中，冬春季节多发。
2.3 临床症状和病理变化
猪传染性胃肠炎的潜伏期很短，通常为12～24 h，仔猪的潜伏期较短，而成年猪的潜伏期略长。10日龄以下的小猪，其死亡率非常之高，甚至可达100%。此外，断奶仔猪和肥育猪也容易出现水样腹泻，虽然其临床症状不明显，但其持续的病期通常超过1周。成年猪症状较轻，腹泻情况不严重，很快会自愈。妊娠期间的母猪，症状通常不明显；但在哺乳期间，母猪表现身体发热、泌乳停滞、严重腹泻等问题。
对病死猪解剖，可以看到它们有严重的急性肠炎症状，尤其是空肠和回肠。肠壁出现卡他性炎症，使得肠壁变得红润和膨大，并且会出现黏稠的分泌物。胃内容物呈现异常，含有大量未消化的食物残渣和黏液。
3 猪德尔塔冠状病毒
3.1 病原学
猪德尔塔冠状病毒的囊膜表面具有明显的冠状纤突，在电镜下可以观察到它们的球形或椭圆形，这种病毒的结构与“皇冠”非常相似，它的基因组大小约25.4 kb。像其他冠状病毒一样，PDCoV在细胞中复制，能够通过多种途径逃逸宿主细胞天然免疫应答。
3.2 流行病学
猪德尔塔冠状病毒于20世纪初在中国香港首次报道，几年之后在美国检测到该病毒，随即暴发。近年来，我国多个省份也有报道，病例不断增多，传播迅速，已经严重威胁到我国养猪业的发展。这种疾病通过接触感染猪或携带病毒猪的粪便进行感染。它通常与PEDV或TGEV混合感染，并且具有极强的传播扩散能力。哺乳仔猪感染PDCoV时，通常会出现突发疾病，表现为严重的腹泻、呕吐，并伴有严重的脱水，最终导致死亡。
3.3 临床症状和病理变化
哺乳期的仔猪感染后，潜伏期通常不超过24 h，迅速表现出急性腹泻症状。在感染后的2～3 d内，仔猪可能出现呕吐。随着时间的推移，4～5 d，病猪会出现严重脱水，体重急剧降低，精神状态极度低迷，最终因器官功能衰竭而致死。相对而言，育肥猪和成年猪虽然同样可能遭受病毒侵袭，但它们的症状表现更轻，死亡风险较低。经过一段时间的自然恢复，绝大多数猪只能够康复，但康复后的猪生长发育速度和生产效率可能会受到影响。病死仔猪胃部和小肠中都含有没被完全吸收的乳凝块，肠壁松弛且变得更厚，而且结肠也出现膨胀。小肠的黏膜也会发生充血或出血。
4 猪轮状病毒
4.1 病原学
猪轮状病毒是引起哺乳仔猪和断奶仔猪胃肠炎的常见病原体，猪轮状病毒属于呼肠孤病毒科，轮状病毒属。猪轮状病毒主要结构蛋白为VP6，根据氨基酸的不同，将轮状病毒分类成A～G 7个血清；流行病学调查发现，引起猪腹泻的猪轮状病毒主要是A群，B、C群也会少量检测到。病毒适应能力很强，在粪便中，它的存活期长达9个月。该病毒无囊膜，对苯酚、乙醇和含氯消毒液等抵抗力很弱，少量接触即可使其灭活。
4.2 流行病学
猪轮状病毒在小肠中感染和定植，随粪便排出，病猪及带毒猪通过排泄物传播病原，是主要的传播媒介。病原体不仅通过消化道传播，还可能通过环境污染导致仔猪间接触感染。在腹泻发作期间，猪群排泄物内病毒载量增加，从而污染设施与环境，促使病毒扩散。猪轮状病毒对各阶段的猪只均有感染性，尤其是8周龄以下的仔猪感染风险最高。得益于母源抗体的存在，新生仔猪对病毒展现出较强的免疫能力。
4.3 临床症状和病理变化
当猪被人为试验感染时，它们会出现严重的腹泻。这些疾病通常会持续3～7 d，然后会慢慢康复。7～21 d的猪，通常会出现比较少的腹泻和脱水，并且死亡率更高。但是，28 d的猪只会出现轻度的腹泻。轮状病毒感染可能会导致严重的肠道病理改变，这些改变可能表现为肠壁变薄、膨胀、出现水状、粉末状、深棕色或浅棕红色的液体。
5 鉴别诊断
5.1 病原分离培养法
通过分离培养技术，我们能够更好地分辨出TGEV，这种技术的最大好处就在于它能够获得更精细的诊断结果，并且还能够帮助更好地理解这种病毒的特征。目前，常使用猪肾细胞（PK-15）或猪睾丸细胞（ST）来培养TGEV。研究者利用非洲绿猴肾细胞（Vero）技术，取得了PEDV分离培养的重大突破，该技术得以持续发展。然而，目前，关于PDCoV的分离和培养技术仍有待继续深入研究和探讨。研究人员发现，PDCoV能在猪的近端肾小管细胞系中稳定有效地增殖，多次传代后，可见明显的细胞病变。但是，由于这种诊断方式操作过程复杂，技术设备要求高，不能应用于快速诊断需求。
5.2 血清学检测法
5.2.1 酶联免疫吸附试验
酶联免疫吸附试验（简称ELISA）在血清学诊断中应用广泛，其快速诊断疾病及抗体监测的功能极为关键。包括间接ELISA和双抗夹心ELISA在内的多种策略被广泛应用于疾病诊断。作为冠状病毒的关键结构成分，其纤突蛋白与核衣壳蛋白展现出高度保守性，这两种蛋白能激发机体的细胞免疫反应，因此在ELISA检测中常作为包被抗原使用。
5.2.2 免疫荧光技术
免疫学分析方法结合荧光标记技术，这种方法称为免疫荧光技术，通过这种技术，可以深入研究特异蛋白在细胞内分布的方式。进一步采用荧光素标记抗原或抗体，可以对抗原定性、定量甚至定位，这种分析方法对病原的动态分布深入研究有着重大意义。但该方法耗时长、对试验设备及人员要求高，不适用于临床样本快速检测。
5.3 分子生物学检测方法
5.3.1 反转录聚合酶链式反应
聚合酶链式反应（PCR）是目前检测猪腹泻病毒的最常用方法，它能够快速扩增微量DNA，从而可以检测出粪便、直肠拭子或肠道样本中的基因组。由于引起猪腹泻的病毒种类较多，且无其他典型病理特征，大量研究人员致力于对引起腹泻的病原体进行快速鉴定和诊断，以制定对应的治疗方法，迅速控制病情。因此，RT-PCR技术出现在人们的视野中，并获得了广泛的认可和应用。韦学雷等人基于TGEV和PDCoV的N基因序列、PEDV M基因序列的多重RT-PCR技术，可以同时检测鉴定三种猪冠状病毒，具有广泛的临床应用前景。
5.3.2 实时荧光定量PCR
通过采用实时荧光定量PCR技术，王以欣等人设计了双启动寡核苷酸引物检测PEDV的方法，具有高灵敏度、特异性和精确定量的优势，可以直接检测出质粒标准品的1.6×101copies/μL最低检测限，而且组内、组间重复检测的变异率也不超过1%，这使得该技术在定性和定量分析上具有显著的优势，可以有效地提升研究的效率和准确性，能够提供精确、迅速的PEDV临床检测服务。
5.3.3 环介导等温扩增技术
环介导等温扩增技术（LAMP）是一种新的DNA扩增方法。相关研究者提出TGEV可视化RT-LAMP检测方法，样品在恒温水浴锅中完成反应，比传统的PCR方法快100倍以上，在指示剂的存在下，该方法检测速度快且结果直观易懂。敏感度达到传统的PCR方法的2倍以上，以巢式PCR作为标准，匹配程度也达到了100%。这种方法对于疾病诊断和病原流行病学研究都具有重要意义。
6 小结
全球范围内猪腹泻病毒的持续蔓延，疫病的预警与治疗变得越来越重要。目前，猪腹泻相关病毒的检测技术主要集中在血清学及分子生物学领域。聚合酶链式反应、免疫层析荧光等技术具有成本低、操作便捷、能够处理大规模病毒等优点，因此被普遍采纳，为实现疾病预警与治疗提供有效的技术支持。然而，上述技术依然有其局限，如特异性、敏感度不高，仍需要进行进一步改进。近年来，ddPCR、iiPCR以及RPA等先进的分析技术已经大大改善了病毒的检测方法，它们不仅解决了血清学和传统PCR的缺陷，而且还极大地缩短了病毒的检测时间，使得猪冠状病毒的诊断变得更加迅速、准确、有效。
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