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甲型流感病毒（IAV）感染对世界范围内养猪业构成了重大挑战，不仅对母猪、对仔猪和育肥猪也是如此。流感病毒在许多养猪场流行。临床情况差异很大。混合感染往往会使诊断变得复杂，需要对临床受影响年龄组以外的病原体进行检测，以确定与疾病过程有关的流感病毒。流感病毒基因变异的动态以及传染性和疾病表达的变化，需要经验和专业知识来解释诊断结果。
我们连续三篇文章针对猪流感进行分享，第一部分我们关注有关该病毒和诊断方法的最新消息。第二部分详细介绍了临床疾病和混合感染，第三部分概述了控制策略。
1、猪流感介绍
猪流感A（IAV）病毒属于正粘病毒科的包膜RNA病毒。一个典型特征是基因组由八个基因片段组成，每个片段至少编码一种蛋白质。八个片段中的两个片段负责表面抗原结构血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）（图1）。IAV根据这些结构分为不同亚型。迄今为止，已经确定了18种HA和11种NA亚型。
图1。代表A型流感病毒。
2009年之前，猪主要有三种甲型流感病毒亚型（swIAV）、H1avN1、H1huN2和H3huN2。当时，只有几个不同的基因型被鉴定出来，它们由所有的基因组片段定义。随着2009年流感大流行期间H1pdmN1pdm大流行株的引入，这种情况发生了变化。最近公布的数据表明，如今，由于H1pdmN1pdm和较老的SWAV谱系之间所有八个基因组片段的重新分配，31种不同的SWAV基因型正在欧洲流行。2015年至2017年，在17个欧洲国家的2457个猪场进行了被动监测。研究显示，与人类流感不同，猪流感病毒全年都能在猪场场检测到，因此不是季节性的。不同地区的亚型分布存在差异。
2、如何检测？
有一系列诊断方法可用于直接检测swIAV。应根据群体情况选择方法和样本数量。鼻拭子适用于甲型流感基质PCR。如果在合适的病毒载量下呈阳性，可通过HA和NA特异性RT-PCR进行分型。应该注意的是，动物通常在感染后5至7天内排毒，并在大约9天后将其从肺部清除。因此，通过个体方法（鼻拭子、支气管肺泡灌洗、肺部）采样的时间点至关重要。由于临床表现往往因继发感染而变得复杂，当出现最严重的症状时，可能无法再检测到swIAV。在感染多个swIAV亚型的情况下，并非所有涉及的亚型都能被同样好地检测到。尤其是在有地方性流感且临床症状不明确的场，建议在不同年龄组使用筛查方法（乳房拭子样本、口腔液样本）。
图1：用鼻拭子取样的仔猪（左）。在病毒保护介质中使用鼻拭子（右）。
图2：乳房擦拭取样。
3、正确检测
如果用PCR联合检测一个混合样本中的五个鼻拭子，几乎不会失去敏感性。这样可以提高检测率，因为有了电泳池，可以用同样的时间处理更多的样本。因此，鼻拭子对流感诊断仍然至关重要。良好的样本质量通常允许输入、分析和培养。重要的是，样品要冷却后通过快递送到实验室。在急性临床暴发中，应从新患病的发烧动物身上采集样本。在地方性感染的畜群中，应根据具有典型症状（如高温）的动物，调整取样动物的选择。病毒检测通常可以在哺乳仔猪早期进行，这时临床症状不明显，由于母源抗体保护仔猪不受感染而抵抗疾病，因此仔猪可能会并携带病毒进入保育段持续散毒。由于仔猪混合在一起使病毒能够迅速传播，断奶后不久是取样的好时机。此外，应对经常出现的临床症状（打喷嚏、抽鼻子、咳嗽、发烧、突然掉队）的日龄组猪进行采样。因此，横断面检测是有利的，在同一时间点对不同日龄组进行采样，以获得猪场循环的swIAV菌株的最佳数据。
4、血凝抑制试验确定抗体
作为一种间接方法（抗体检测），对来自优选未接种动物的血清样本进行“血凝抑制（HI）试验”可以检测之前未直接检测到的其他相关亚型。HI基于IAV的凝血作用被抗体抑制的事实。如果一头猪的血清可以防止试验中使用的流感病毒株血液凝固，这表明该猪已经产生了针对类似亚型的特异性抗体。因此，与ELISA相比，HI检测具有优势，ELISA只能提供有关甲型流感的一般信息。然而，从仔猪到保育期结束的血清样本通常不显示抗体，即使这些猪在保育期曾接触过SWAV。母猪源性抗体可以防止血清转化，不仅通过接种疫苗，而且通过之前感染的母猪将抗体传给仔猪。因此，在保育舍中对仔猪进行血样采集尚无定论，但是对育肥或后备母猪、母猪的配对血清样本可以提供良好的结果。
5、小结
尽管诊断通常非常费力，但它们是确定猪场中流行的菌株和感染时间的唯一方法。这是实施正确管理措施和疫苗接种方案的先决条件。
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