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哪些消毒剂有助于猪场洗消的核酸消除(qPCR阴性)?

曲博士猪群健康管理 2022-04-07

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对于阳性猪场,洗消效果评估是非常重要的复产验收环节之一。目前使用最为普遍的评估方法是利用qPCR检测病毒核酸,该方法能快速、精准的检测出环境中残留的病原基因片段。

对于阳性猪场,洗消效果评估是非常重要的复产验收环节之一。目前使用最为普遍的评估方法是利用qPCR检测病毒核酸,该方法能快速、精准的检测出环境中残留的病原基因片段。其缺点是无法区分活病毒和灭活病毒,即灭活病毒残留的核酸也会导致RT-PCR结果为阳性。

 

在某些案例中,经过3次以上的洗消流程后,依然qPCR检测弱阳性(CT值在35-40之间),让人焦虑,抓狂。

 

猪场管理者面对此结果,只能默认猪舍环境未洗消彻底,需要重新花费洗消成本和时间进行再次洗消,直至RT-PCR结果为阴性,才敢启动复产。

 

现有的病毒分离方法虽然能区分病毒的感染力,但它的培养条件要求苛刻,专业水平要求更高,仅个别专业实验室可执行,并不适用于养殖一线的快速诊断。因此,在沿用qPCR方法的基础上,能够破坏病原核酸的消毒剂成为了养猪生产者的选择。

 

非瘟病毒属于囊膜病毒,能被绝大多数的消毒剂杀灭,鉴于各类消毒剂对非瘟核酸破坏能力的相关研究文献数据较少,因此本文引用Andrew 等[1]发表的《Effects of disinfection on the molecular detection of porcine epidemic diarrhea virus》,该文以同属于囊膜病毒的猪流行性腹泻病毒(PEDV)为研究对象,评选出能破坏病原核酸的消毒剂,可为猪场的消毒剂选择提供参考。

 

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Andrew 等[1]选择猪场常用的苯酚、季铵盐、季铵盐+戊二醛、过硫酸氢钾复合物(氧化剂)和次氯酸钠5种消毒剂,使用不同浓度、不同温度和不同接触时间开展体外试验、模拟现场试验和动物试验。

 

从研究结果看,所有测试组均未分离出PEDV活病毒,即以上消毒剂均能有效杀灭PEDV,但是,苯酚、季铵盐和季铵盐+戊二醛消毒剂的qPCR检测结果均为阳性,表明这3种消毒剂不能有效破坏PEDV核酸或效果较差;而过硫酸氢钾复合物(氧化剂)和次氯酸钠均有qPCR阴性测试组,表明这2种消毒剂能不同程度地破坏PEDV核酸。详见表1、图1和图2。

 

表1 在有/无10%(v/v)粪浆、3种不同温度条件下,用qPCR检测各测试组PEDV阳性数

 

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a 阳性对照组样品分离出PEDV活病毒,但消毒剂测试组和阴性对照组不能分离出PEDV活病毒

 

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图1 消毒剂作用PEDV细胞培养液的qPCR平均值,*表示结果为阴性

 

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图2 消毒剂作用含有10%(v/v)粪浆的PEDV细胞培养液的qPCR平均值,*表示结果为阴性

 

从上述结果可知,为了降低qPCR对目标基因片段的检出率,可以在洗消最后一个环节,使用推荐浓度的过硫酸氢钾复合物(例如:过硫酸氢钾1:200)或高浓度的次氯酸钠进行熏蒸或喷洒消毒,确保更好的消除病原核酸,从而尽可能的避免残留核酸(死亡的病毒)对RT-PCR结果的干扰。

 

从上述试验结果看,次氯酸对核酸的消除能力好于各浓度的过硫酸氢钾的消除能力。

 

需要注意的是,Andrew 等[1]指出高浓度次氯酸钠虽然对核酸消除的效果也好(尤其是高温下),但是对人的健康有危害,吸入会造成呼吸道刺激,甚至引起肺水肿,同时会腐蚀金属设备,引起橡胶制品变质。另外,次氯酸钠的持续作用时间较短,对光敏感。

 

因此,在使用高浓度次氯酸钠时要注意防范。另外,消毒前充分清洗猪舍内粪、尿、血等有机物,此外提高消毒温度更有利于消毒剂清除病原核酸。

 

在现场应用方面,可以使用氢氧化钠、过硫酸氢钾、次氯酸钠三种消毒剂轮换或结合使用,在确保消毒效果的同时,最大可能性地消除病毒的核酸,确保qPCR检测结果阴性。

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