方案解读 | 猪流行性腹泻灭活疫苗的效力高于活疫苗所产生的效力

关于猪流行性腹泻疫苗的免疫效果，假想的被认为活苗可以产生很高的IgA，也会产生一定水平的IgG，但这篇文章发现在阴性猪群中，活苗并不能产生IgA与IgG（有可能是低于检测水平），并且灭活苗也能产生高水平的IgG抗体，优于活苗效果。对于中和抗体而言，得到了同样的结论，灭活苗诱导的中和抗体亦优于活苗。我们在生产中，对于后备群体使用的活苗驯化，这种做法的价值和意义值得反思。

猪流行性腹泻活疫苗与灭活疫苗免疫仔猪抗体反应的评估

杜久斌  唐慧芬  潘晓梅  赵晓英  廖勇  刘强德 

孙彦军  贺 笋

《猪病防控》

2022年第6期75-77；82页

猪流行性腹泻病毒(PEDV)是猪的一种高致病性接触性传染病，属于冠状病毒，1971年首次在英国被发现，随后比利时、荷兰、德国、瑞士、法国、匈牙利和保加利亚等国均有该病的报道，我国从80年代证明有  猪流行性腹泻病的发生。到2000年，该病已在我国全面流行，特别是从2010年起，我国出现新的高致病性PEDV毒株，导致我国免疫猪群中再度发病，给我国养猪业造成巨大的危害,对PED的预防和防控应以疫  苗接种为主，国内外的研究者在PED疫苗研究方面已做了大量工作,但目前为止，还没有研制出特别有效的疫苗可以控制PED疾病的发生。目前市面上以PED细  胞灭活疫苗和PED细胞弱毒活疫苗为主来预防PEDV。 在临床上使用PED灭活疫苗免疫2次后，母猪血清和乳汁中所产生的中和抗体、IgA和lgG水平，高于2针活疫苗免疫和1针活疫苗加1针灭活疫苗的免疫效果。

有效的PED疫苗免疫猪只后能产生较高的中和抗体，保护猪只免受PED病毒的感染。由于临床受野毒感染的影响，不能客观评价活疫苗和灭活疫苗所产生的抗体水平10。因此，在本研究中，选择未感染过PEDV 的仔猪免疫商品化PED细胞活疫苗和灭活疫苗，综合评 价不同疫苗免疫仔猪后血清的抗体反应情况。

01材料与方法

1.1 试验材料

猪流行性腹泻病毒：猪流行性腹泻病毒(XJ-DB2 株)代次F14代，病毒含量106.0TCID50/mL,批号：20150917。

细胞：Vero细胞，购自中国兽医药品监察所，由天康生物制药公司保管、传代。

疫苗：PED细胞活疫苗、灭活疫苗均为市售疫苗。 

试剂盒：猪流行性腹泻lgA抗体检测试剂盒，购自爱德士公司，批号：21028;猪流行性腹泻lgG抗体检测试剂盒，购自Biovet Inc公司，批号：230204。

试验动物：选用PED抗原、抗体阴性妊娠母猪所产1月龄仔猪。

1.2 试验方法

1.2.1 试验分组及免疫

筛选产前15d左右妊娠母猪运输至试验动物舍，隔离饲养。母猪分娩后仔猪母乳喂养至1月龄，将仔猪分成3组，每组5头。第I组免疫活疫苗，10头份/头，免疫1次；第Ⅱ组免疫灭活疫苗，2 mL/头，首次免疫完间隔14日加强免疫1次；第Ⅲ组为空白对照组，不做免疫。试验动物分组及免疫情况见表1。

1.2.2 样品采集

试验猪只于首免时、 一免后14日和一免后28日分别采集血清，用于抗体水平检测。

1.2.3 抗体检测

将待检血清、阳性血清和阴性对照血清56℃水浴灭活30 min。用MEM(含10μg/mL胰酶)对灭活后的待检样品、阳性对照和阴性对照血清在96孔U型板内进行2倍(1:2、1;4、1:8、1:16、1:32 … 1:256稀释)系列稀释。每个稀释度4孔，每孔100 L。用MEM(含10μg/mL胰酶)将检验病毒稀释成病毒含量为200TCID50/0.1mL的病毒液。将稀释好的病毒液按每孔100μL加到含有血清的96孔U型板中，置37℃5%CO2培养箱内中和1h。取培养24～48h的96孔培养板细胞，弃去培养液，将中和1h的病毒与血清的混合物转移至96孔培养板相应的孔内，每孔100 L,置37℃5% CO2.培养箱中培养并观察5日，用SpearmanKarber法计算血清中和抗体效价。按抗体检测说明书进行IgA、lgG抗体检测。

02试验结果与分析

2.1 中和抗体结果

3组试验猪免疫前血清中和抗体效价均不高于1; 2,免疫后14日，活疫苗抗体效价在1:10左右，灭活 疫苗抗体效价在1:25左右；免疫后28日，活疫苗抗 体效价在1;8左右，灭活疫苗抗体效价在1:180左 右。具体结果见图1。

2.2 lgA抗体结果

3组试验猪免疫前和免疫后血清lgA抗体水平均为 阴性，无论是活疫苗免疫组还是灭活疫苗免疫组，血清 lgA抗体水平均无升高。具体结果见图2。

2.3 IgG抗体结果

活疫苗免疫组和空白对照组免疫前后lgG抗体均为 阴性；灭活疫苗免疫组免疫后14日lgG抗体S/P值在 2.3左右，免疫后28日S/P值在3.0左右。具体结果见 图 3 。

03讨论

对于主要在肠道上皮细胞中复制的肠病毒，局部产生的病毒特异性IgA抗体是黏膜表面初级适应性防御的最重要功能。血清中lgG抗体反应很少参与预防大多数肠道病毒感染。血清或黏膜IgA抗体水平已被用 来预测疫苗的效力和个体或畜群对肠道传染病如轮状病 毒感染的免疫状态。因此，PEDV血清IgA抗体检测广 泛用于评估感染和疫苗对PEDV的免疫效果。

本试验通过未感染过PEDV的猪只肌肉注射PED灭 活疫苗和PED活疫苗，对产生的IgA、lgG和中和抗体 进了综合评估。结果显示，活疫苗免疫猪只不能产生I- gA抗体，而IgA主要由黏膜系统产生，说明肌肉注射 PED活疫苗不能使PED疫苗弱毒进入肠道的肠壁纤毛上 皮细胞增殖，从而不能诱导猪肠壁黏膜产生lgA抗体。

试验前，筛选临床上PED抗原、抗体阴性猪进行PED灭活疫苗免疫试验，免疫后猪只产生了较高的IgA  抗体、IgG抗体和中和抗体水平。分析原因可能是临床阴性猪只之前感染过PED野毒，感染后的B细胞免疫反应，有全身性和黏膜性PEDVlgA抗体反应，在肠系膜淋巴结和回肠中有PEDV  IgA抗体记忆的B细胞。这时使用灭活疫苗免疫，就能够再次激活lgA。这也是本次试验选用临床PED抗原、抗体阴性母猪，在试验动物房生产，使用生产的仔猪进行的原因。

04结论

猪流行性腹泻活疫苗和灭活疫苗肌肉接种未感染过 PEDV的猪只均不能产生IgA抗体。

猪流行性腹泻活疫苗肌肉接种未感染过PEDV的猪 只不能产生lgG抗体，可以产生较低水平的中和抗体。

猪流行性腹泻灭活疫苗肌肉接种未感染过PEDV的 阴猪只，能产生高水平的中和抗体和高水平的IgG抗体。

从以上结论可以看出，肌肉接种未感染过PEDV的猪只，PED灭活疫苗所产生的抗体反应高于接种活疫苗所产生的抗体，从所产生的抗体水平来看，灭活疫苗的效力高于活疫苗所产生的效力。