经典猪瘟弱毒活疫苗或 E2 亚单位疫苗接种的母猪所生仔猪的血清动力学分析

大家一定好奇台湾猪场经典猪瘟的防控情况，猪瘟免疫使用的疫苗种类、使用效果等，为此，本期我们特别选择一篇 2020 年发表的题为“经典猪瘟弱毒活疫苗或 E2 亚单位疫苗接种的母猪所生仔猪的血清动力学分析”的试验性文章，供大家参考。

本文主要内容：

1.台湾没有净化猪瘟，对猪群进行全面的疫苗接种是预防和控制猪瘟最有效的策略。目前使用两种猪瘟疫苗，猪瘟活苗和 E2 疫苗。

2.台湾猪瘟活疫苗在过去使用中出现的几个缺点：

2.1 无法进行血清学鉴别诊断；

2.2 尽管不排除其他因素的影响，的确观察到猪瘟活疫苗免疫存在副反应，有时候还观察到仔猪出现严重的

蓝耳症状（国立屏东科技大学动物疾病诊断中心的数据，未发表）；

2.3 活疫苗会在猪群之中传播，可通过车辆在猪场之间传播，活疫苗存在排毒的可能；

2.4母源抗体对猪瘟活疫苗存在严重干扰，母源抗体的水平与猪瘟活疫苗的免疫效果之间存在负相关；

2.5 在台湾，猪瘟活疫苗只建议在母猪产后 4 周接种，不建议普免；

2.6对 5-8 周龄蓝耳病毒感染的仔猪进行猪瘟活苗的接种，可能导致免疫失败；

注意，以上 6 点不足，作者都是针对台湾使用的猪瘟活疫苗的归纳，不是针对我们使用的猪瘟 C 株活苗的归纳。请大家注意可能存在的巨大差异。

3. 猪瘟 E2 亚单位疫苗在台湾猪场使用中表现出来的优势：

3.1 在母猪产前 4-5 周进行 E2 疫苗接种后，其所生仔猪的猪瘟抗体水平在 9-12 周时仍为阳性，这使得猪瘟疫苗的接种可以推迟，以避免与 5-8 周龄的蓝耳病毒易感期重合。

3.2 猪免疫一针 E2 疫苗，就能有效诱导出高水平的猪瘟抗体直至屠宰；

3.3 本研究猪群中母猪免疫 E2 所生仔猪的保育成活率提高（猪场饲养者的观察），同时发现母猪免疫 E2 所生仔猪在 5-8 周龄的蓝耳病毒病毒载量和检出率显著低于母猪免疫猪瘟活苗所生的仔猪；

3.4 基于 E2 蛋白的猪瘟亚单位疫苗配合 Erns(E0)抗体 ELISA 试剂盒可以实现对猪瘟野毒的血清学鉴别诊断，并提供良好的保护。

4. 本研究对我国猪瘟防控的借鉴意义：

4.1 培育蓝耳阴性猪，让猪只更健康，对猪瘟活苗的免疫应该更有效（其实对其他疫苗的免疫效果也会更好）。这也是国内一些种猪场全力以赴做好蓝耳净化，预期得到的收益之一。

4.2 对于大多数蓝耳阳性场，选择一个蓝耳感染率低的时间免疫疫苗。

4.2.1 国内个别猪瘟防控很好的企业是这样做的，仔猪 8-10 周才开始免疫猪瘟活苗。但是，对于有猪瘟感染压力的猪场而言，这个方法是有风险的，毕竟母猪免疫猪瘟活苗所生的仔猪在 4 周-8 周的猪瘟抗体普遍不高或者是阴性。

4.2.2 更稳妥的做法本文推荐的那样，母猪免疫使用优质的 E2 疫苗，让仔猪有母抗持续到 13 周左右，在13 周蓝耳感染基本结束的时候，免疫 E2 一针就能上市。

4.2.3 作者可能不知的是，2017 年在国内首家上市的天康生物研发生产的猪瘟 E2 亚单位疫苗-天瘟净，在仔猪猪瘟免疫时间的选择上更加自由，不用刻意等待蓝耳病毒感染的结束。大量临床使用数据证明：免疫猪瘟活苗所生的仔猪在 5 周-9 周期间，即便被蓝耳或者圆环、伪狂犬等病毒感染了，免疫天瘟净 1 毫升产生的猪瘟抗体也很好，可以直接维持到肥猪上市。

Serodynamic Analysis of the Piglets Born from Sows accinated with Modified Lie accine or E2

Subunit accine for Classical Swine Feer

经典猪瘟弱毒活疫苗或 E2 亚单位疫苗接种的母猪所生仔猪的血清动力学分析

全文链接：

https://www.ncbi.nlm.nih.go/pmc/articles/PMC7350299/

摘要 

由猪瘟病毒（猪瘟）引起的经典猪瘟（猪瘟）是最重要的猪病之一，给全世界的养猪业带来了巨大的经济损失。系统性的疫苗接种是预防和控制这种疾病的最有效策略之一，推荐使用的两种主要的猪瘟疫苗，弱毒活疫苗（ML）和亚单位 E2 疫苗。台湾自 2006 年以来没有猪瘟病例的报告，系统性的疫苗接种也已经实行了 70 年。在此，我们研究了免疫猪瘟活疫苗或 E2 疫苗的母猪所生仔猪的血清动力学，并在猪场调查了猪繁殖与呼吸综合征病毒（蓝耳病毒）的病毒载量和猪瘟抗体水平之间的相关性。对来自 42 个蓝耳阳性猪场的 1398份血清样本进行了评估，通过 PCR 确定蓝耳病毒载量，并通过商用 ELISA 检测猪瘟抗体水平。比较两种母猪疫苗接种方案（母猪产后 4 周接种猪瘟活苗，或者产前 4-5 周接种 E2 疫苗），发现母猪免疫猪瘟活苗所生仔猪在 5-8 周龄的猪瘟抗体水平最低，而母猪免疫 E2 疫苗所生仔猪在 9-12 周龄猪瘟的抗体水平最低。说明 5-8 周龄和 9-12 周龄分别是以上仔猪接种猪瘟疫苗是最佳时间。母猪免疫猪瘟活苗组所生仔猪，其蓝耳病毒病毒载量和猪瘟抗体水平之间存在非常显著的负相关（P<0.0001），母猪免疫猪瘟活苗组所生仔猪的蓝耳病毒检测率（27.78%）明显高于母猪免疫猪 E2 苗组所生仔猪（21.32%）（P = 0.011）。此外，在5-8 周龄的蓝耳病毒检测率上，母猪免疫猪瘟活苗组所生仔猪（42.15%）和母猪免疫猪 E2苗组所生仔猪（29.79%）也有显著差异（P = 0.019）。我们的研究结果表明，在蓝耳病毒易感期的 5-8 周龄仔猪进行猪瘟活疫苗的免疫接种，可能会使仔猪的免疫系统过载，这应该是养猪业的一个急需关注的问题。

1、简介

由猪瘟病毒引起的经典猪瘟是最重要的猪病之一，给全世界的养猪业带来了巨大的经济损失，被世界动物卫生组织（OIE）列为一类传染病。猪瘟病毒（原名猪霍乱病毒）与牛病毒性腹泻病毒 1 型、牛病毒性腹泻病毒 2 型和边境病病毒同属于黄病毒科中的瘟病毒属。最近，猪瘟病毒被归类为瘟病毒属 C。

猪瘟是免疫抑制性疾病，其几种免疫逃逸机制已被阐明，如骨髓造血细胞、淋巴细胞和淋巴器官的凋亡、自噬和焦亡。在被感染的胎儿和用高毒力或低毒力猪瘟病毒攻毒的仔猪的外周血单核细胞中观察到 CD4/CD8 比率降低，这说明表明免疫反应失调。猪瘟病毒感染后的临床症状主要取决于猪的年龄和病毒株的毒力，临床形式可以表现为急性、慢性和持续性感染，持续性感染通常发生在母猪怀孕 50-70 天。一般来说，急性猪瘟导致的临床和病理特征与非洲猪瘟非常相似。此外，在确诊猪丹毒、猪圆环病毒 2 型及猪圆环病毒相关疾病、沙门氏菌病和猪蓝耳病等时候，必须要先排除猪瘟。这些共有的临床症状可能导致猪瘟被误诊为蓝耳病毒感染。蓝耳病毒感染也会引起妊娠母猪的繁殖障碍和育肥猪的呼吸道问题。蓝耳病毒感染可诱发多种免疫抑制反应，如：①NK 细胞细胞毒性活性失调；②IFN-α产生不良；③促进免疫抑制细胞因子的分泌，如白细胞介素-10（IL-10）和转化生长因子-β。

系统性疫苗接种和扑杀是控制猪瘟的两种主要策略。由于扑杀的成本巨大，在猪瘟流行地区，系统性接种是一种更有效的猪瘟控制策略。猪瘟活疫苗和亚单位疫苗，这两种主要的猪瘟疫苗在许多国家广泛使用。猪瘟活疫苗不仅可以诱导体液免疫反应，还可以诱导细胞介导的免疫反应，以对抗猪瘟病毒。然而，猪瘟活疫苗的缺点是其容易受到母源抗体的抑制，并且不能通过血清学监测来区别猪瘟感染猪只和猪瘟疫苗免疫猪只。基于 E2 蛋白的猪瘟亚单位疫苗配合 ELISA 对 Erns(E0)抗体监测来实现血清学的鉴别诊断，并提供良好的保护。

当母猪被高毒力或低毒力猪瘟病毒感染时，猪瘟病毒跨胎盘传播在猪瘟抗体产生之前就发生了。因此，为防止仔猪先天带毒，母猪接种疫苗后必须要产生快速而坚固的免疫力。在台湾，猪瘟活苗自 20 世纪 50 年代开始使用，并被证明具有良好的保护作用。猪瘟活疫苗只建议在母猪产后 4 周（空怀阶段）接种，以避免引起持续性感染。为了避免母源抗体干扰对猪瘟活苗有效性的干扰，仔猪应在 6 和 9 周时接种疫苗。然而，在保育阶段蓝耳病毒仍然是一个主要问题，并且很难控制，这与台湾的猪瘟活疫苗接种时间重叠。猪瘟活疫苗接种后，有时候还观察到仔猪出现严重的蓝耳症状（国立屏东科技大学动物疾病诊断中心的数据，未发表）。导致蓝耳病和猪呼吸道疾病综合征的最合理解释是应激，这不单是接种疫苗引起的，与猪瘟活疫苗的副作用、针头携带的病原体、细菌病原体（如副猪嗜血杆菌）的协同作用或其他一些因素都有一定的关系。相比之下，E2 疫苗建议在母猪产前 4-5 周接种，并能引起高水平的中和抗体，仔猪接种可以推迟到 10-12 周龄，这时大多数仔猪已经从蓝耳病毒感染中康复。以前的研究结果表明，猪瘟活疫苗接种前的蓝耳病毒感染会明显抑制猪瘟的抗体反应。此外，在蓝耳病毒感染的急性期进行猪瘟活疫苗免疫可能导致免疫失败。然而，对不同类型的猪瘟疫苗产生的母源抗体水平与临床的蓝耳病毒载量之间的相关性还有待研究。在此，这项回顾性研究旨在阐明不同类型猪瘟疫苗免疫的母猪所产仔猪的猪瘟抗体和蓝耳病毒载量的动态变化，以进一步了解猪瘟疫苗和蓝耳病毒之间的相互作用，因为蓝耳病毒在大多数地区普遍存在。

2、结果

2.1. 母猪免疫不同类型的猪瘟疫苗所生仔猪在不同周龄的猪瘟抗体水平

本研究收集来自 42 个蓝耳病毒阳性商品猪群的 1398 份血样，猪瘟活苗免疫母猪所生仔猪的血清 943 份（以下简称为活苗组，来自 29 个猪群）和 E2 免疫母猪所生仔猪的血清455 份（以下简称为 E2 组，来自 13 个猪群）。对不同年龄段的仔猪猪瘟抗体水平进行评估发现， 当猪小于 4 周龄和 5-8 周龄时，E2 组比活苗组的猪瘟抗体水平高很多，差异非常显著（P< 0.001）。但在 9-12 周龄时，活苗组的猪瘟抗体水平明显高于 E2 组（P< 0.01）（译者解释：仔猪免疫了猪瘟活苗的样本没有剔除。），但在 13 周龄后，两组之间的差异没有统计学意义。（图 1）

图 1. 猪瘟活疫苗免疫母猪组和 E2 疫苗免疫母猪组出生的仔猪的基于 ELISA 的体液免疫反应。猪瘟抗体以阻断率表示。虚线表示阻断率，低于阈值的样品判定阴性。阻断率在 30 和 40 之间的样本未可疑（灰色区域）。阻断率大于或等于 40 判定为阳性。误差条显示的是标准偏差 (SD)。P值<0.05，<0.01 和<0.001 分别被认为差异显著、高度显著和非常显著。

2.2. 不同组别中未接种猪瘟疫苗的仔猪的蓝耳病毒载量和猪瘟母源抗体水平的相关性。

为了研究不同组别中蓝耳病毒载量和猪瘟母源抗体水平的相关性，通过聚合酶链反应（PCR）对所有血清样本的蓝耳病毒载量进行了定量。仅在未接种猪瘟疫苗的仔猪中计算蓝耳病毒的存在，共有 802 个样品符合这一标准。使用线性回归分析计算了未接种猪瘟疫苗的仔猪中蓝耳病毒载量和猪瘟抗体水平之间的相关性。活苗组的仔猪的蓝耳病毒载量与猪瘟抗体水平之间存在非常明显的负相关（P< 0.0001）（图 2a）。令人惊讶的是，在 E2 组的仔猪中，蓝耳病毒载量和猪瘟抗体水平之间没有显著的相关性（P>0.05）（图 2b）。

图 2. 用线性回归分析来计算活苗免疫母猪（a）和 E2 免疫母猪（b）所生的未接种猪瘟疫苗的仔猪中蓝耳病毒载量和猪瘟母源抗体水平。虚线表示阻断率，即低于此阈值的样品为阴性。阻断率在 30 和 40 之间为可疑（灰色区域）。大于或等于 40 的阻断率为阳性。P 值<0.05，<0.01 和<0.001 分别被认为差异显著、高度显著和非常显著。

2.3. 不同组别中未接种猪瘟疫苗的仔猪的病毒载量和蓝耳病毒检出率

在不同组别未接种猪瘟疫苗的仔猪中，活苗组的 517 份样品中的 152 份（29.40%）和E2 组的 285 份样品中的 72 份（25.26%）为蓝耳病毒阳性，检出率的差异没有统计学意义（P=0.24）。然而，活苗组蓝耳病毒的载量却明显比(从 1.38 到 5.75 log10 蓝耳病毒基因组/µL 不等，中位数为 3.09 log10）E2 组（从 1.46 到 6.15 log10 蓝耳病毒基因组/µL 不等，中位数为 2.66 log10）要高（P = 0.03）（图 3）。

图 3. 猪瘟活苗组和 E2 苗仔猪血清中的蓝耳病毒载量。红色横线代表每组的中位数浓度。非配对双尾 T 检验用于比较两组之间的蓝耳病毒载量的差异。P值<0.05，<0.01 和<0.001 分别被认为差异显著、高度显著和非常显著。

2.4. 不同年龄组仔猪的蓝耳病毒的检测率和病毒载量

对小于 4 周龄、5-8 周龄和 9-12 周龄的仔猪中的蓝耳病毒载量评估显示，两种疫苗免疫母猪所生仔猪中的平均蓝耳病毒载量没有明显差异（图 4）。令人惊讶的是，E2 组 13 周龄以上的仔猪只中没有发现蓝耳病毒病毒感染（图 4 和表 1）。此外，我们比较了不同类型猪瘟疫苗免疫母猪所生仔猪在不同年龄段的蓝耳病毒检出率，表 1 为不同类型的猪瘟疫苗免疫母猪所生仔猪中蓝耳病毒的检测率详情。与其他年龄段相比，5-8 周龄的猪蓝耳病毒总的检出率最高（37.81%），活苗组猪的蓝耳病毒检出率（42.15%）明显高于 E2 组（29.79%）（P=0.019）。活苗组的猪的蓝耳病毒总体检测率明显高于 E2 组的猪（P = 0.011）（表 1）。

图 4. 猪瘟活苗和 E2 免疫母猪所生仔猪在不同年龄阶段的血清样品中的蓝耳病毒载量（点，左 Y 轴）和蓝耳病毒的检出率（柱状图，右 Y 轴）。圆点代表每头猪的蓝耳病毒载量。红色横线代表每组的中位数浓度。条形图代表不同年龄段猪只的 PRRS 检测率。用非配对双尾 T 检验来比较活苗组和 E2 组之间的蓝耳病毒载量。P值<0.05，<0.01 和<0.001 分别被认为差异显著、高度显著和非常显著。

3、讨论

在工业化的养猪生产中，经常发生多种病毒混合感染，无论是个体还是猪群，也可能还会伴随细菌混合感染，猪瘟活苗的系统性免疫使得以上情况进一步复杂化。为了避免这种影响，我们从商品猪群中共收集了 1398 个样本进行统计分析，这项研究讨论了蓝耳病毒和猪瘟疫苗免疫之间相互作用，以指导猪场的生产实践。

在没有根除猪瘟的地区，如台湾，常规疫苗接种是预防和控制该病最有效策略之一。两种主要的猪瘟疫苗，猪瘟活苗和 E2 疫苗，被推荐使用，猪瘟活疫苗不仅可以诱导体液免疫反应，还可以诱导细胞介导的免疫反应，以对抗猪瘟野毒感染。然而，使用过程中发现猪瘟活疫苗的几个缺点：①无法鉴别诊断；②猪瘟活疫苗对猪副反应较大；③活疫苗会在猪群之中传播；④活疫苗可通过车辆在猪场之间传播。此外，母源抗体对猪瘟活疫苗在猪群的免疫效果的影响已被充分讨论，母源抗体的水平与猪瘟活疫苗的免疫效果之间存在负相关。在台湾，猪瘟活疫苗只建议在母猪产后 4 周接种，以避免疫苗产生的持续感染。我们的结果显示，在猪瘟活苗组中，5-8 周龄的仔猪猪瘟抗体水平最低（图 1），这可能是一个适合于仔猪进行猪瘟疫苗接种的时间点。除母源抗体外，其他几种免疫抑制性病毒都有可能干扰猪瘟 活疫苗的效力，如蓝耳、圆环病毒 2 型和伪狂犬病毒。

蓝耳病毒引起的免疫抑制与 IL-10 刺激和炎症细胞因子下调有关。也有研究表明，当猪瘟活疫苗的复制被蓝耳病毒诱导的肿瘤坏死因子-α所抑制时，会导致免疫失败。以前的研究表明，在蓝耳病毒感染的急性期进行猪瘟活疫苗免疫可以抑制猪瘟疫苗接种的效果，因此猪瘟疫苗接种时间不应与蓝耳病毒感染期重合。为了根除猪瘟，猪瘟活疫苗在一线的使用效果得进一步研究。根据国立屏东科技大学动物疾病诊断中心的诊断报告，一些保育猪在猪瘟活疫苗接种之后会出现严重的蓝耳疑似症状（数据未公开）。在工业化的养猪生产中经常有混合感染（如蓝耳病毒，猪圆环 2 型），同时继发细菌感染，如副猪嗜血杆菌。一项研究显示，混合感染（如蓝耳、圆环混感）可能会影响猪瘟活疫苗的复制或病毒活性。猪圆环病毒相关疾病引起的多因素综合征已经成为台湾的一个主要问题。幸运的是，自从 2 型圆环疫苗在台湾上市后，2 型圆环引起的问题已经得到明显解决。目前，蓝耳病毒仍然是一个主要问题，而且在保育阶段很难控制，表现在仔猪 5-8 周龄的蓝耳病毒总体检出率（37.81%）最高（表 1）。综合来看，应该进一步考虑猪瘟活苗的效力和在蓝耳病毒易感期接种猪瘟活苗造成的应激因素，可能会诱发蓝耳病毒感染出现临床症状。

在 E2 组，9-12 周龄的猪瘟抗体水平最低（图 1）。为了提高猪瘟疫苗的效力，这个时间窗口可能更适合于仔猪的猪瘟疫苗接种。母猪产前 4-5 周用 E2 疫苗接种，仔猪猪瘟疫苗的接种时间可以推迟到 10-12 周龄，这时它们对蓝耳病毒的敏感性较低，这在大多数台湾猪群中是可以观察到的。此外，E2 组在乳猪阶段（小于 4 周龄）的猪瘟抗体水平明显高于活苗组（图 1），反映了母猪的猪瘟抗体水平不同。这种差异是由于母猪在产前 4-5 周接种了 E2 疫苗，产生了足够高的猪瘟抗体水平（图 1）。然而，考虑到母猪是在产后接种猪瘟活苗，有些母猪会返情多次导致免疫推迟，这些因素都会导致仔猪猪瘟抗体水平的进一步下降。相反，E2 疫苗可以诱导 E2 特异性中和抗体，对不同基因型的猪瘟野毒的攻击提供完全的保护。母猪接种猪瘟 E2 亚单位疫苗已显示出一些优势，如①仔猪唾液中猪瘟核酸的检出率急剧下降；②仔猪免疫一针 E2 疫苗，就能有效诱导出高水平的猪瘟抗体直至屠宰；③本研究猪群中保育猪的成活率提高（猪场饲养者的观察），这与我们对本研究结果的解释是一致的。最后，最重要的是，猪瘟活苗与 E2 亚单位疫苗或灭活疫苗的主要区别是，猪瘟活疫苗可以在猪体内复制。

总之，我们的研究揭示了猪瘟活苗和 E2 疫苗分别免疫的母猪所生仔猪的血清动力学。在猪瘟活苗免疫母猪所生仔猪中，蓝耳病毒载量和猪瘟抗体水平之间存在着非常明显的负相关关系。在 5-8 周龄时，猪瘟活苗免疫母猪所生仔猪的猪瘟抗体水平最低，在此期间，猪对蓝耳病毒高度易感，应避免接种猪瘟活疫苗。相反，在母猪产前 4-5 周进行 E2 疫苗接种后，其所生仔猪的猪瘟抗体水平在 9-12 周时仍为阳性，这使得猪瘟疫苗的接种可以推迟，以避免与 5-8 周龄的蓝耳病毒易感期重合。此外，我们的研究结果表明，在 5-8 周龄的仔猪蓝耳病毒易感期进行猪瘟活苗的免疫接种，可能会使仔猪的免疫系统过载，这应该是工业化猪场生产中的一个重要问题。因此，建议使用非复制性抗原的疫苗，如 E2 亚单位疫苗。

4、材料和方法 

4.1. 样品来源和处理

仔猪血样收集在 BD 采血管中，其中含有凝血活化剂和凝胶，交给台湾国立屏东科技大学的动物疾病诊断中心处理。所有仔猪样品分为两组，猪瘟活苗组和 E2 组。猪瘟活苗组的仔猪来自产后 4 周接种猪瘟活苗的母猪，而 E2 组的仔猪来自产前 4-5 周接种E2 亚单位疫苗的母猪（Bayoac® CSF-E2, 拜尔动物健康）。用多用途离心机在 2150g离心 15 分钟，然后将血清转移到 1.5mL 离心管中，保存在-80◦C。

4.2. 样品制备和 PRRS 实时 PCR

使用 MagNA Pure LC 总核酸分离试剂盒（罗氏, 美国）和 MagNA Pure LC 2.0 仪器进行核酸提取。使用 PrimeScriptTM RT 试剂盒（takara, 日本）进行 cDNA 合成。为了定量血清中的蓝耳病毒载量，在 LightCycler® 96 实时荧光定量仪（罗氏，瑞士）上完成基于 ZNA 探针的检测。

4.3. 血清学评估

血清中的猪瘟抗体水平用商业化 ELISA 试剂盒（HerdChek CSF 抗体 ELISA 检测试剂盒，爱德士，美国）进行评估。用 Biochrom Anthos Zenyth 200st 分光光度计（安图斯仪器,澳大利亚）在测量波长为 450nm（OD450）进行读数，如果重复阴性对照（

）的平均 OD450大于 0.5，重复阳性对照的平均阻断率大于 50，则认为该检测有效。阻断率%用公式计算，阻断率%=

，阻断率小于或等于 30 为阴性，在 30 和 40 之间为可疑，大于或等于 40定为阳性。

4.4. 统计学分析

采用 T 检验来评估两组在不同条件下的蓝耳病毒载量的差异。通过线性回归分析蓝耳病毒载量与猪瘟抗体阻断率之间的关系。不同年龄组的蓝耳病毒阳性率用卡方检验确定。P值<0.05、<0.01和<0.001 分别被认为统计学上差异显著、高度显著和非常显著。

5、译者简介

李程

天康生物技术服务经理

硕士毕业于华中农业大学预防兽医专业，从事疫苗研发工作。曾在集团负责生产管理类工作，熟悉现代化猪场的生产管理，生物安全体系建设等。