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口蹄疫具有强烈的传染性，可带来严重的经济损失。除了生物安全，疫苗免疫是防控口蹄疫最经济最有效的手段。安全高效的疫苗是成功预防乃至净化口蹄疫的先决条件。口蹄疫疫苗质量受到毒株、抗原含量、佐剂、保质期等因素影响。在临床实际使用中，为何不同的疫苗免疫后抗体水平不同？为何选用与流行毒株“亲缘关系近”的疫苗，抗体水平依然不高，甚至发病？种种现象一度让使用者出现费解。本研究对两款不同口蹄疫产品进行临床免疫试验，为口蹄疫疫苗的科学选择及使用提供参考。
1、材料与方法
1.1 试验猪群
广东某规模化猪场，母猪存栏9,600头，两点式生产，封闭式管理，猪群整体健康状况良好。
1.2 试验材料
口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗（疫苗X、Y，分别购自天康生物制药有限公司和W公司）、蔗糖密度梯度形成仪、紫外分光光度计、口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒（购自中国农业科学院兰州兽医研究所）。
1.3 试验方法
1.3.1 疫苗抗原测定
采取蔗糖密度梯度离心法获得一定体积口蹄疫病毒146S病毒粒子，使用紫外分光光度计在259nm紫外光下检测吸收峰，从而测定口蹄疫疫苗抗原含量。
1.3.2 免疫方案
分别选取经产母猪和9周龄仔猪进行试验，免疫方案见表1。
表1 试验免疫方案
1.3.3 抗体测定
于免疫当天、免疫后8周对每组母猪随机采血；于免疫当天、免疫后4周对每组仔猪随机采血；分离血清，-20℃冷冻保存；进行猪口蹄疫O型抗体测定。口蹄疫O型抗体检测按照相应试剂盒说明书，判定标准：抗体效价＜1:64为阴性，1:64—1:128为可疑，≥1:128为阳性。
2、结果分析
2.1 抗原146S含量检测结果
如图1所示：疫苗X的146S含量为33.7μg/ml，是疫苗Y的两倍多，二者差异显著。
图1 两种口蹄疫疫苗146S含量检测结果
2.2 O型抗体检测结果
2.2.1 母猪抗体检测结果
如图2所示，免疫前两组抗体阳性率均低于80%，免疫8周后抗体有了明显提升，且Ⅰ组（疫苗X组）阳性率明显高于Ⅱ组（疫苗Y组）。Ⅰ组阳性率提升了19%；Ⅱ组抗体阳性率提升了12%，Ⅰ组增幅明显高于Ⅱ组。免疫前两组抗体离散度均较大，免疫后均降低，且Ⅰ组明显低于Ⅱ组；Ⅰ组离散度显著降低到10%，降幅达35%；Ⅱ组离散度降低到39%，降幅仅3%。
图2 母猪免疫前后O型抗体检测结果
2.2.2 仔猪抗体检测结果
如图3所示，免疫前两组抗体阳性率较高，均超过90%。免疫后，Ⅲ组阳性率升至100%，而Ⅳ组阳性率却降至65%。对比两组免疫后抗体效价，Ⅲ组不同效价的抗体比例均远高于Ⅳ组，且Ⅲ组抗体效价＞1:512的比例高达70%，结果如图4。两组抗体结果差异显著。
图3 仔猪免疫前后O型抗体检测结果
图4 仔猪免疫后O型抗体检测结果
3 分析与讨论
当前，我国主要流行O、A型口蹄疫，亚洲Ⅰ型处于非免疫无疫状态。从监测情况看，当前我国口蹄疫流行毒株依然复杂，O型口蹄疫有Ind-2001e、Mya-98和CATHAY 等毒株，A 型为 Sea-97毒株。2021年发生3 起O型口蹄疫疫情，近 3 年未发生A型口蹄疫疫情。临床生产中往往监测O型抗体，2021年在边境地区监测到A型的 A/Sea-97 境外分支病毒，未来不排除A型口蹄疫点状发生的可能，因此应同时做好A型抗体的监测。近几年O型口蹄疫Ind-2001e检出率逐渐超越Mya-98毒株；同时Mya-98和CATHAY毒株变异较大，其主要功能基因序列与之前流行毒株差异较大，趋向形成新的进化分支，另外疫苗免疫猪血清对田间分离毒中和效价较低。
国际公认免疫口蹄疫疫苗是防控该病最经济有效的措施。目前，临床生产中主要使用的是口蹄疫灭活疫苗。此类疫苗抗原是完整的病毒颗粒（146S），具有充分的T细胞和B细胞位点。口蹄疫疫苗的免疫应答以体液免疫为主，在一定范围内抗原含量越高，产生抗体水平越高、抗体维持时间的也就越久。更为重要的是，抗原含量高，才能对扑朔迷离的田间流行毒株产生更好的交叉保护力。同时，抗原含量高，更容易削弱母源抗体的干扰作用，缩短甚至避免仔猪免疫空窗期。另外，合理的免疫程序对于充分发挥疫苗作用至关重要。
本研究评估了两款不同口蹄疫疫苗的抗原含量、母猪及仔猪免疫前后抗体变化情况。结果显示，两款疫苗抗原含量差距显著，疫苗X的146S显著高于疫苗Y。母猪群分别免疫后，抗体阳性率均显著提升，离散度均下降；但疫苗X组（天康生产）抗体的阳性率及离散度变化均明显优于疫苗Y组。同时也发现，该场母猪群抗体阳性率并未达到100%，这可能与猪群健康度或疫苗免疫程序有关，后续可以对母猪群进行加强免疫。仔猪群分别免疫后，抗体阳性率均显著变化；疫苗X组阳性率升至100%，而疫苗Y组却下降至65%，结果大相径庭；疫苗X组（天康生产）不同效价的抗体比例均远高于疫苗Y组。这可能与母源抗体的干扰作用有关，疫苗X由于抗原含量高，可以快速产生高水平的抗体，更大程度的削弱母源抗体的干扰作用。
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