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协和医学院:无需DNA提取的快速高通量非洲猪瘟病毒检测

猪相关2021-04-02 09:36:38

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非洲猪瘟病毒在全球范围内造成严重的社会经济影响,大规模、快速、可靠检测对于非洲猪瘟疫情的控制至关重要。

非洲猪瘟病毒在全球范围内造成严重的社会经济影响,大规模、快速、可靠检测对于非洲猪瘟疫情的控制至关重要。

 

但是常规分子检测需要对核酸进行纯化,耗时、耗工,容易产生核酸丢失和污染,无法实际实现大规模的主动筛查,对于一些资源稀缺地区也难以应用。

 

病毒检测

 

协和医学院和兰州兽医研究所的研究团队,开发了一种使用多探针辅助DNA捕获和扩增技术(MADCAT,一种敏感、简单、可靠的新方法),直接在全血或其他复杂基质中进行非洲猪瘟病毒的检测。通过独特的DNA捕获方法,仅将目标DNA捕获入孔中进行后续扩增。

 

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疯猫技术(MADCAT)摒弃了复杂的提取程序,并且可以实现超快的高通量检测。从采样到出结果,96个样品疯猫技术只需要100分钟,而标准的实时定量PCR通常要3-4个小时。

 

当检测系列稀释的全血样品时,检出限(LOD)是0.5个拷贝/微升,是OIE所推荐的qPCR方法的。该方法对于其他猪病原的100%特异。在对48个现场样品的临床检测中,22个阳性样品都被准确检出,且Ct值低于OIE推荐的qPCR方法,确认了这种方法的高诊断灵敏度(100%)。

 

由于疯猫技术的高通量、特异的高灵敏度以及高成本收效,该方法在非洲猪瘟病毒的主动筛查中有望发挥重要作用。


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