铁骑力士
广告
您的位置: 首页 > 专栏 > 技术 > 内容

LAMP非瘟检测技术,灵敏度高且成本更低

PSY应用研究院 2019-11-14

阅读()

唾液中非瘟病毒出现的时间要早于血液中,猪群采样可以采用唾液样,但是被感染猪只早期唾液样本中的病毒含量较低,需要用灵敏度更高的检测技术来检测。
 
  定期监测对防控非瘟的意义
  
  如果把非瘟病毒比喻为“敌人”,我们防非瘟的主要任务就是要把即将进入或有可能进入猪场的“敌人”提前发现并消灭掉;或把刚刚进入猪舍的“敌人”发现并消灭掉,在潜伏期的早期发现“敌人”就为后面打赢这场战斗赢得时间。
  
  但是,非瘟病毒太小,我们肉眼不能看见,一般显微镜也看不到,要想提前发现“敌人”必须要进行定期监测。
  
  为了实时了解“敌人”的动向,我们需要经常性的对猪群、饲料、饮水、用具、车辆和设备、猪场周围环境样本(水、土、虫、蚊蝇等)进行检测,一旦发现“敌人”,及时查找漏洞,尽量消灭“敌人”于萌芽状态。由此可见,猪场如果不能自己检测非瘟,就相当于一个瞎子在打架,不知道“敌人”在哪,很被动。
  
  考虑到非瘟的潜伏期,这种常规检测至少每周要进行一次。由于唾液中非瘟病毒出现的时间要早于血液中,猪群采样可以采用唾液样,但是被感染猪只早期唾液样本中的病毒含量较低,需要用灵敏度更高的检测技术来检测。
 
非洲猪瘟检测
  
  LAMP非瘟检测技术的优势
  
  建议中小规模猪场可以采用环介导等温扩增技术(LAMP)来进行非瘟病毒的检测,这种技术只需一台水浴锅和小离心机就可以进行,所需的仪器设备只要几千元左右就可以在网上购置,成本很低。
  
  研究表明LAMP法检非瘟的灵敏度比普通PCR高约100倍,可能检测到10个以内病毒剂量的样本,而普通PCR的灵敏度一般在1000个病毒剂量以上。
  
  另外,LAMP法所需设备简易,操作简单,经简单培训后完全可在中小规模猪场内实现自己检测,1小时就可出结果,且结果肉眼可见,大量做其成本可控制在10元/样,成本比荧光定量PCR低很多。
  
  如果一个200头母猪的中小猪场每周检测50个样本,算上DNA提取,其花费也就千元左右,约占平均每周出栏77头肥猪(20头肥猪/母猪)价值25万元(15元/斤,110kg/头)的千分之四。
  
  这种场内快速、高灵敏度的检测技术可为中小规模猪场非瘟的防控战斗赢得宝贵的时间。在猪场内自己检测,不会有交叉污染。而送检到场外中心实验室检测,常由于不同猪场间阳性样本的交叉污染,导致检测结果出现假阳性。
  
  表1  非瘟病毒检测LAMP法和PCR法比

  
  LAMP非瘟检测技术具体操作细节
  
  首先用血液样本的DNA提取试剂盒提取猪血液样本的DNA(其他样本也可以采用相应的DNA提取试剂盒来提)。
  
  然后采用扩增非瘟病毒专用的引物进行LAMP扩增,一般在水浴锅中就可以进行,60-65℃恒温扩增1小时,然后80℃ 2分钟灭活扩增酶。
  
  离心后可以PCR管底看到白色沉淀(Mg2P2O7)。也可在管中加入Calcein荧光染料,LAMP扩增后在紫外灯下看是否有绿色荧光,有绿色荧光为阳性,否则为阴性。这两种方法都不需要电泳就可以判断结果,更不需要高值的荧光定量PCR仪。
  
  LAMP法扩增后肉眼可见管底有白色沉淀为阳性

免责声明:部分文章资料来源于互联网,已标明来源,版权归原作者所有,内容仅供读者参考,如有侵犯原作者权益,请及时留言联系我们删除!
江西仲襄本草生物有限公司
广告