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非瘟检测,检“唾液”,还是检“血液”?看你要什么?

农牧诸易 2020-05-15 11:23:13

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猪的唾液是什么?就是猪的口水!唾液成分主要来自猪的体液,但并不全是猪的体液,同时还存在很多外来物(如:饲料、饮水、灰尘等)的污染。
  中国自开始出现非洲猪瘟以来,行业内一些专家一直都在反复强调检测样品要用唾液。其极力主张检测样品要用唾液的理论依据,是唾液会比血液更早出现阳性结果。
  
  猪的唾液是什么?就是猪的口水!唾液成分主要来自猪的体液,但并不全是猪的体液,同时还存在很多外来物(如:饲料、饮水、灰尘等)的污染。
  
  由于非洲猪瘟荧光定量 PCR 检测试剂(特别是进口的 IDEXX 非洲猪瘟荧光定量 PCR 试剂)高度敏感,只要样品中含有 1 个非洲猪瘟病毒(不管是活的非洲猪瘟病毒还是死的非洲猪瘟病毒)目标基因片段,即可成功地扩增出目标基因特有的扩增曲线,并据此作出检测结果阳性的结论。考虑如下几种情况:
  
  猪的口腔曾经接触过外来污染物中的非洲猪瘟死病毒,唾液中存在非洲猪瘟死病毒,荧光定量 PCR 检出非洲猪瘟阳性。但是病毒显然不会对猪造成感染。
 
非瘟监测
  
  猪的口腔曾经接触过外来污染物中零星的非洲猪瘟活病毒,唾液中存在零星的非洲猪瘟活病毒,荧光定量 PCR 检出非洲猪瘟阳性。但这些零星的非洲猪瘟病毒要成功侵入机体,首先得逃过被唾液中特有的一些具有免疫活性或消化功能成份的灭活和降解,之后还需要突破胃肠道等一系列粘膜免疫屏障,才能最终对机体构成感染。
  
  因此,唾液中检出非洲猪瘟病毒,并不代表猪一定存在非洲猪瘟病毒感染。唾液样本检测阳性与否,与猪是否存在病原感染不存在必然因果关系。科学养猪第一线大多数专家都不认同唾液采样检测的方法,认为血液(全血加抗凝剂)采样检测的方法更科学。
  
  血液中的成份随时都在接受机体免疫系统的监控,免疫系统曾经识别过的异体蛋白或大分子物质很快都会被机体的免疫系统清除,极少有外来污染物存在。
  
  血液采样操作污染比较容易控制,只要坚持选用一次性注射器,并做好采样部位皮肤的消毒,基本不存在其他污染途径。
  
  血液样品检测前可以按预先设定的比例精确稀释,检测结果(Ct 值)对于定量分析更有参考价值。采样和检测操作规范的非洲猪瘟荧光定量 PCR 检测结果(Ct 值),对于对供样猪的病原感染状况作出准确判断,具有重要参考意义。以 IDEXX 的非洲猪瘟荧光定量 PCR 检测试剂为例,正常情况下,该试剂的阳性对照样品 Ct 值一般都是 28 ~29。如果血液样品的 Ct 值检出在 30 以上或 30 以下但连续 3 天以上不急剧下降,则基本可以肯定供样猪是非洲猪瘟耐过猪或疫苗免疫猪;临死猪血液样品的Ct 值在 30 以上,则基本可以认定病猪死亡的主要病因不是非洲猪瘟而是因为继发其他病原。单纯因非洲猪瘟发病致死的猪,血液样品 Ct 值基本都在 25 以下,严重者低于 15。
  
  总之,对于非洲猪瘟荧光定量 PCR 检测,如果送检单位只是想对猪群是否存在非洲猪瘟病毒(包括野毒和疫苗毒)感染有一个基本的了解,唾液采样送检也许无可不可,毕竟唾液采样操作相对比较简单,但如果送检单位想利用检测结果作更精确的定量分析,则必须用全血+抗凝剂。因为唾液采样一般都是用棉签擦拭或醮取少量唾液,实验室处理样品时再用生理盐水或 PBS 溶液将棉签中的唾液浸洗出来做检测。但棉签中到底含量多少唾液样品无法精确计量,通过 Ct 值推算唾液样品中的病毒含量缺乏最基础的数据,用高科技仪器做出的定量检测结果对于样品的定量分析毫无参考意义。
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