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进行非洲猪瘟病毒检测,猪场怎样选取需要采样的动物和采哪些样?

中国农业大学动物医学院副教授周磊2020-02-12 15:15:36

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组织样品的采集,建议不轻易解剖病死猪,避免在猪场中形成二次污染和二次传播,应远离猪(舍)场进行病理剖检,剖检后要及时做好无害化处理及人员的洗澡、消毒等。
  1 ASFV相关采样
  
  1.1 采样动物的选择
  
  关于采样动物的选择,有几个原则:第一,出现典型病例时,可能已经进入暴发期,此时应在安全条件下剖检有典型临床症状的动物,采集脾脏、淋巴结等脏器。第二,出现发烧、减料、流产以及不明原因死亡等异常猪的时候,第一时间隔离,然后进行检测,等待结果出来后,再对周围的环境或猪群进行进一步的检测。第三,抽检时优先选择生长迟缓、精神状态差的猪。第四,基于风险评估的抽检,对出现临床症状的临近动物要进行检测,要进行跟动物移动相关联的针对性采样,出现风险升高事件之后的回顾评估检测(譬如发现拉猪的人员出现了净区和污区的交替跨越),根据生产数据阈值报告(SPC)出现预警后的针对性检测,对具体问题进行具体分析。
  
  猪栏
  
  1.2 样品选择
  
  样品的选择:第一,如果要进行抗体、抗原的检测,可采全血,也可以采集病死猪或者剖检猪的脏器,包括脾、淋巴结、扁桃体、肾脏等。如果是活的猪,我们可能会通过鼻腔拭子或全血进行检测。如果要检测抗体,一般是进行凝血,就是采集血清或口腔液进行抗体检测。
  
  组织样品的采集,建议不轻易解剖病死猪,避免在猪场中形成二次污染和二次传播,应远离猪(舍)场进行病理剖检,剖检后要及时做好无害化处理及人员的洗澡、消毒等,注意剖检兽医或其他人员的回场回岗流程。可采集脾、淋巴结、扁桃体和肾脏用于病原检测。
  
  血液样品采集,一般情况下如果是检测抗原可以采全血,包含淋巴细胞,可以增加检出率,推荐使用EDTA来进行抗凝,因为肝素会影响PCR的效率。如果是采血清,一般会用采凝血,但如果是发病的猪,有些可能会出现凝血比较差的情况,因为血小板消耗得太多。另外,如果出现疑似病例,应先隔离再采样。血液中的病毒含量高,因此,要尽量减少在猪舍内进行采血操作,以减少血液散毒污染风险。
  
  口腔液的采集,以栏舍为单位检测,可以作为广泛性的监测,不仅可以监测猪群,还可以监测环境的带毒情况,相对来说可以减少采样的频率。但是一定要使用敏感性的方法,保证能够检出足够少的病毒。如果猪群中有一些精神状态不好的猪,可能不愿意去咬棉绳,这就相当于把一些可能有病的高风险猪排除掉了,所以在进行检测的时候一定要注意观察,如果有必要可对猪进行单独的处理。
  
  检测
  
  1.3 样品采集数量和频率
  
  关于采样的频率和数量,以前我们的监测会基于流行病学的分析,通常会考虑置信区间以及流行率,还有易感动物的易感性。在95%的置信区间、10%的阳性率情况下,通常计算出来可能30个左右的样品就够了。但是在非洲猪瘟的流行和传播过程中,其流行率可能在初期的时候非常低,可能在1%,可能就需要采集大量的样品才能检测到。所以,我们应该基于风险和成本的考虑,去检测一些高风险、出现疑似症状的异常动物。
  
  猪群
  
  1.4 样品送检包装要求
  
  第一,减少因送样导致的污染扩散。可以进行消毒,或采用标准包装,以减少可能带来的污染。第二,对唾液样品要进行冷链运输。因为唾液里含有酶或者可能会对其中的核酸有破坏作用,影响检出效率,所以推荐进行冷链运输或者添加酶抑制剂,避免降解来增加检出率。
 
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