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3月23日/下午
众所周知，李曼中国养猪大会作为全国乃至全球高水平、高影响力的猪业盛会，为参会代表及参会企业提供了一个探讨养猪行业前沿技术和最新科技成果的平台，受到来自中国乃至世界养猪行业同仁的高度关注，为推动我国养猪事业的发展产生重要的积极作用。
2023年3月23日下午，第十一届李曼中国养猪大会猪病诊断会前论坛在湖南长沙国际会议中心-星沙厅05室召开。主持人为农业农村部种猪质量监督检验测试中心（广州）樊福好。
会议日程
猪病诊断（博日科技赞助）
主持人：樊福好
1:30pm - 非洲猪瘟诊断的历史教训，樊福好，农业农村部种猪质量监督检验测试中心（广州）
2:00pm - 猪病的诊断工具，法比奥·瓦努奇，明尼苏达大学
2:30pm - 休息
3:00pm - 非洲猪瘟以及猪冠状病毒现场快速检测技术研究，刘斐，南京农业大学
3:30pm - 断奶仔猪腹泻的鉴别诊断与预防，郭昌明，吉林大学
4:00pm -在猪场水平监控病原，赛萨尔·科尔索，明尼苏达大学
4:30pm - 问答
1 非洲猪瘟诊断的历史教训
樊福好，农业农村部种猪质量监督检验测试中心（广州）
图 樊福好，农业农村部种猪质量监督检验测试中心（广州）
5个非瘟诊断的方法：
1.临床诊断，整体的表现特征是厌食、呕吐、出血、吐血
2.病理诊断：主要症状为出血和脾脏肿大
3.流调诊断：
4.核酸诊断：对比红细胞吸附实验的不可靠性和衍生性错误，核酸诊断时间短并有很高的特异性。
5.抗体诊断：由于非瘟感染的母猪会进行间歇性排毒，这种情况下可以对猪群进行抗体检测，同时结合核酸诊断，从而判断猪群状态。
6.对猪群非瘟情况诊断方法，从18年到现在经历了不同阶段。
2021-2022主观判断为主，客观诊断为辅；
2021-2022 客观诊断为主，主观判断为辅；
2023-未来 客观诊断为主，主观判断消失。
2 猪病的诊断工具
约翰·迪恩，明尼苏达大学
图 约翰·迪恩，明尼苏达大学
1.诊断测试很少像预期的那样100%准确，一种传染病的诊断不能只用一次测试就能完全确定，良好的诊断需要对所涉及的猪群和猪只有广泛的知识，并具有结合多种信息来源的经验进行判断并熟练地结合不同敏感性和特异性的测试。
2.诊断工具—猪群观察：
查看猪群的历史记录，包括来源，位置，死亡率，扑杀，以前的问题等
观察猪群状态，包括活动，状况，呼吸，排尿，排便
观察猪只的成长情况，包括体重、活动量、状况
闻闻猪的气味，比如是否是缺水
检查猪群的生长资源。包括设施、饲料、水、空气
3.敏感性和特异性
敏感性=真阳性/(真阳性+假阴性)，具有高敏感性的阴性测试(即几乎没有假阴性)有助于排除疾病
特异性=真阴性/（真阴性+假阴性），具有高特异性(即几乎没有假阴性)的阳性检测有助于诊断疾病
4. 贝叶斯定理与正检验的预测价值：检测结果为真阳性的概率不仅取决于检测的敏感性和特异性，还取决于被研究人群中疾病的患病率。在疾病流行率高的人群中，阳性检测结果为真阳性的几率明显更高。相反，如果非常敏感和特定的测试应用于疾病流行率非常低的人群，大多数阳性测试实际上将是假阳性。
5.诊断过程中的挑战：选择诊断的方法，认识偏差，投资于排除因素和不断回顾策略。
3 非洲猪瘟以及猪冠状病毒现场快速检测技术研究
刘斐，南京农业大学
图 刘斐，南京农业大学
1.非洲猪瘟流行现状：非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员，可感染各个年龄段的猪只，其中以强毒力毒株感染引起的高出血性和高致死率为特征，致死率可高达100%。ASF的高传染性、高发病率和高死亡率，给我国乃至世界养猪业造成了巨大的经济威胁。2018年2019年，全球共销毁约3000万头猪，直接经济损失高达20亿美元。至今，ASFV依然在全球范围内传播
猪冠状病毒流行现状：冠状病毒是引起仔猪腹泻的重要病原，主要包括猪流行性腹泻病毒 (Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、猪 传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus of swine, TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(Porcine delta corona virus，PDCoV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine acute diarrhea syndrome coronavirus，SADS-CoV)。各种年龄猪都可发病，尤其是 3~10 日龄仔猪最易发病。感染的猪均以呕吐、腹泻、脱水和肠道出血为主要特征， 且常常呈现隐性感染或多病原混合感染，给世界各地的养猪业均造成了巨大威胁。 PEDV和TGEV是目前分布最广的猪腹泻病毒性病原，对哺乳仔猪致死率可达100%；在河南地区猪腹泻样本中， PDCoV阳性率达35.06%，与PEDV混合感染率达24.03%；SADS-CoV在2016年于我国广东首次发现。仅2017年 引起国内猪只死亡数达25000头。
目前常用检测技术及优缺点：
2. 冠状病毒快检方法的研究进展
（1）开发了一种基于CRISPR/Cas12a和RT-LAMP的多重核酸检测平台，用于检测PEDV、TGEV、PDCoV和SADS-CoV；
（2）将RT-RAA与CRISPR/Cas12a系统相结合，建立了一个多路复用、快速、便携式的PEDV检测平台；
（3）微流控-RT-LAMP芯片检测系统，可以同时检测PEDV、PDCoV和SADS-CoV。
3. 非洲猪瘟快检方法的研究进展：
（1）基于铁蛋白显示的竞争性ELISA快速检测ASFV
（2）双抗夹心胶体金试纸条快速检测ASFV P30抗原
（3）CRISPR/Cas12a结合等温扩增技术实现一管检测ASFV核酸
（4）基于液滴磁流体技术的快速qPCR检测ASFV
（5）基于信号过滤和放大比色等温扩增检测ASFV
4. 超快速PCR检测技术：
该技术结合了快速变温扩增检测技术以及试剂冷冻干燥技术，可以实现核酸快速、便捷、精 准检测。
超快速PCR技术与传统的核酸检测技术相比有着显著的优势：（1）检测时间短：该技术无需复杂的操作和精密的仪器，且采用了 一步法核酸提取技术及快速变温扩增技术，大幅度缩短了检测时间；（2）精准度高，人为污染少：该技术采用了全封闭的操作系统，能 有效的避免了大规模操作时的实验室人为污染；（3）试剂的常温保存：该技术应用了冷冻干燥技术，实现了试剂的 常温保存和运输。
5. 非瘟病毒快检方法
本实验室建立了多种非瘟现场检测方法：（1）针对ASFV慢性感染、非瘟“耐过猪”等核酸无法检出的情况，本实验室的非瘟IgG抗体检测方法可以实现快速、简单、灵敏的现 场检测；（2）对于早期检测，可采用本实验室建立的非瘟sIgA抗体检测方法，该方法最早可于感染后6天检出；（3）对于急性感染和死亡病例，可采用本实验室建立的基于等温扩增的ASFV核酸试纸条检测，该方法灵敏度最高可达1拷贝。
非瘟POCT 未来我们将持续对该技术进行改进：（1）缩短时间：改善快速变温扩增技术，进一步缩短扩增时间；（2）提升灵敏度：优化检测条件，进一步提升该方法的灵敏度；（3）提高检测通量：改进检测仪器，提高该方法的检测通量；（4）实现多病原的同时检测：结合多病原共检技术，实现多病原的同时单管检测。
超快速PCR检测未来，我们将进一步开发针对ASFV的快速、灵敏的现场检测，如：抗体和核酸共检试纸条、基于试纸条的高通量检测等。
4 断奶仔猪腹泻的鉴别诊断与预防
郭昌明，吉林大学
图 郭昌明，吉林大学
1. 断奶仔猪健康是养猪行业重要难题，是衡量猪场经济效益的主要指标。同时也是养猪场重要常见的临床病症，是影响仔猪健康的最主要因素。仔猪腹泻的病因多、发病机制复杂，轻者影响仔猪生长发育，严重者引起死亡。给诊断与防治带来困难。断奶仔猪腹泻与断奶应激有密切关系。
2. 断奶仔猪腹泻的主要危害：（1）生长停滞，采食量下降；（2）肠道菌群微生物失衡；（3）免疫力下降；（4）疫苗免疫效果不佳；（5）继发性感染复杂诊断困难。
3. 仔猪不同发病过程的病因分类
4. 仔猪腹泻的疾病流行情况比较
5. 诊断内容：
流行病学调查：发病猪群调查，发病时间、日龄阶段分布、发病率、死亡率、发病病程，暴发传播强度。猪场以往发病史，查阅过去的兽医档案。地区周围疫情，是否在本地区流行。饲养环境调查，注意猪场布局，圈舍结构，周围环境。生物安全调查，措施是否到位
临床诊断：群体检查，仔猪健康程度、精神、采食、饮水情况，腹泻发病过程、发病共同症状、临床症状在流行前后是否相同。个体检查，粪便性状、精神状态、营养、姿势及运动、被毛及皮肤、眼结膜、体表淋巴结、体温、呼吸等。饲养管理调查，饲料与管理、密度、通风、温度、卫生、消毒与生物安全措施
病理学诊断：病理剖检变化；病理组织学观察；检测样品采集，适时采样，无菌采样，典型采样，安全采样，包装运输
病原学诊断：病毒分离鉴定，病料处理，接种细胞，接种鸡胚，电镜观察。分子生物学鉴定，实时荧光定量PCR(real-time PCR)，数字PCR（dd-PCR），普通PCR，基因测序。
血清学诊断：抗原检测，主要应用竞争ELISA方法。抗体检测，主要应用间接ELISA方法。血液生化检测，炎性因子、免疫因子、特异 蛋白酶。
6.鉴别诊断：症状鉴别诊断，从临床表现出发，以主要症状或病症为线索，将一大堆的疾病联系起来形成诊断树，而后在逐步把他们区分开来。病变鉴别诊断，从剖检变化出发，以基本病变为线索，将若干相关疾病串联起来，而后在逐步把他们区分开来。实验室鉴别诊断即进行综合分析诊断。
7. 断奶仔猪腹泻预防策略：断奶应激管理；优质饲料营养；精细化管理；科学制定免疫方案；合理使用药物添加剂预防保健。
8. 断奶仔猪腹泻的具体预防措施：仔猪断奶日龄不易过早，21-28天比较合适；早诱饲，早补料，训化消化系统的适应性；加强环境控制，减少断奶应激反应，温度23-26℃，湿度，密度0.3平米，通风、卫生消毒；提高日粮品质，低蛋白饲料能降低腹泻的发生，采用逐渐换料过度，减少饲料营养应激；科学制定免疫方案，选择合适疫苗；药物与添加剂预防：多维电解、有机酸、酶制剂、微生态、中草药。
5 利用诊断工具了解畜群的健康状况
赛萨尔·科尔索, 明尼苏达大学
图 赛萨尔·科尔索, 明尼苏达大学
1. 目前有不同的可用资源用来进一步了解如何监测/监视疾病状况，监测说明为评估某一特定群体的健康和疾病状况而持续进行的努力，监视則是用来说明一个更积极的系统，意味着如果数据显示疾病的流行或发病率超过某一临界值，将采取某种形式的直接行动
我们需要有一个明确的目标，检测健康状况的变化即新进感染或稳定化与疫苗的合规性。同时知道需要检测抗原或抗体以及该使用血清学和/或逆转录聚合酶链式反应测试（RT-PCR）
說明结果时，需要从诊断学的角度了解具体的疾病并知道该测试的结果是什么。
2. 蓝耳疾病在各个猪厂的举例说明：
公猪站：
目标：在引种后尽早检测PRRS，避免通过精液进行下游传播
临床诊断包括公猪会有断食、体温、喷嚏-咳嗽、腹泻的症状
实验室诊断方法：对血液样本（血清）进行RT-PCR检测和对血液样本进行ELISA检测
样品采集：通过跗关节静脉收集血液血液
建议每周PCR检测一组5头公猪并对有临床症状的公猪尽早检测。同时母猪厂在使用前先扣留精液，直到检测结果出来没有问题再使用
对公猪和精液的监测/监视将是一项重要的投资，但这将比PRRS疫情爆发时的成本更低
母猪厂：
目标：与公猪类似，核心母猪场和繁殖母猪场在引种后需要确定后备母猪的蓝耳状态
由于PRRS可以在后备母猪群传播，所以引种的后备母猪需要经过隔离和PRRS检测合格后才能进入种猪群；
临床症状：PRRS可能引起母猪的断食、流产、母猪死亡、仔猪腹泻等，但是从临床角度讲，并不是所有的PRRS菌株都会有相同的表现。最后还是需要实验室诊断。
实验室诊断：ELISA检测，如果农场血清抗抗体是阴性，则没有接种蓝耳疫苗。建议检测量为每月30-60个样本。RT-PCR检测，可以检测猪只血清或仔猪一周龄以内的处理液。
育肥厂：
在育肥厂几乎没有主动检测，整体的发病率被低估。
3.总结：
了解实际的疾病状况会给生产者和兽医减轻风险，而利用诊断工具的投资是重要的，这笔投资比猪厂发病要来的划算。监视/监测系统需要有明确的目标和当意外发生时的行动计划。整个团队需要准备充分解释说明结果。
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