广告
在非洲猪瘟防控常态化大背景下，猪场中各种疾病的监测尤为重要。在猪群健康监测中，除了选择稳定性好、敏感性高、特异性强的检测试剂与检测方法以外，一线的样品采集技术也同样决定了检测结果能否反应真实状态。
本文介绍了几种主要的无创或微创采样的方法，以及如何使用相应采样工具和操作程序。包括棉绳（口腔液）、棉签/植绒拭子（鼻拭子、肛门拭子、尾根血拭子）、纱布（环境表面），棉签和纱布的采样原则为“干的采湿的、湿的采干的”。
1 口腔液样品
1.1 适用对象
各阶段猪群皆适用，其中保育猪使用棉绳直径1cm；育肥、母猪、大栏后备等中大猪使用棉绳直径2cm。
1.2采样材料（采样数量N）
10mlEP管N只，1m长棉绳N+根（大栏采样多点悬挂3-5根棉绳），一次性PE手套3×N只（1只收集样品使用）、记号笔、隔离服、鞋套、一次性乳胶手套多副。每份样品的材料单独包装。
采样前清点准备耗材
1.3采样时间
建议在早晨猪饲喂之前，若是自由采食，前一天晚上关闭料筒。采样前需断水半小时，大型栋舍内分区域、时段断水，母猪断水不超过2小时。
1.4采样方法
采样前戴一次手套，打开套装包装，将棉绳悬挂在栏内干净的区域内，并远离水槽、饲料槽；将绳股松开采样；调节棉绳至猪肩高度；将绳子系牢，栏内啃咬放置20-30分钟。
棉绳悬挂方式和角度
1.5唾液收集
戴一次性手套，将被啃咬的部分棉绳放入一次性PE手套中，捏紧拉扯棉绳，将口腔液挤入手套中；将所有口腔液收集到手套的一个手指处，揪下手指套后倒入离心管，做好标记。每收集一次棉绳，更换一次性PE手套，注意防止交叉污染，如污染到乳胶手套，需及时更换。注意：棉绳唾液收集过程要务必注意交叉污染的问题，建议两人合作。
1.6检测
口腔液样品收集后需及时检测，检测前先12000rpm/min离心5分钟去除口腔液中的杂质后，使用上清提取核酸检测。
2 口、鼻拭子及肛门拭子样品
2.1 适用对象
限位栏母猪、公猪、发病或死亡的保育猪、育肥猪的无伤口单独采样，大猪使用大号棉签或者植绒拭子（长度15cm – 20cm），保育猪使用小号棉签或植绒拭子（长度8cm – 15cm）。
2.2采样材料（采样数量N）
根据采样计划准备足量的合适规格棉签或植绒拭子（优先选用植绒拭子）、2ml EP管N只（小棉签）或10ml EP管N只（大棉签）、记号笔、隔离服、鞋套、一次性乳胶手套一副、一次性PE手套若干。
2.3 样品采集
戴上一副乳胶手套，外面套上一层PE手套，取出干净的棉签准备采样，采集口、鼻、肛门拭子请勿将棉签沾湿，根据应激大小，按照肛门拭子、口腔拭子最后采集鼻拭子。
口腔拭子：对于活猪，轻柔地靠近猪只后将棉签伸入猪的口腔，在牙龈和猪唇之间来回刮擦，收集唾液，要求棉签完全湿润为止；对于死猪，将棉签在死猪口腔内反复刮擦，覆盖整个口腔，棉签表面须可见脱落的粘膜。
肛门拭子：对于活猪，采集肛门拭子时站在猪身后，尽量避免接触猪，在猪尾翘起时迅速找到肛门，轻柔的将拭子插入到肛门内约深入3~5cm，拭子要尽量的沿着直肠壁刮擦，尽可能采集到粪便和直肠粘膜；对于死猪则同样要求可见粪或粘膜。
鼻拭子：采集活猪鼻拭子时轻柔靠近猪只，在其安静时将拭子对准鼻孔，角度向外、向下方成45度角方向迅速伸入猪鼻腔中，若鼻液较少则多采集几次。如果猪只过于敏感，则使用消毒后的锁口器保定后完成采样，小猪的鼻拭子可以由饲养员抱起小猪固定头部后采集。对于鼻液较少的死猪，按上述方向将拭子伸入鼻腔并刮取粘膜。
保育猪鼻拭子采样的角度和深度
2.4 拭子样品收集
拭子样品在采集后应立刻打开干净无菌的2ml EP管（或者10ml EP管），将拭子头部插入管中，折断棉签柄并立刻盖上管盖并标记，换外层PE手套后采集下一头猪，避免交叉污染。
2.5检测
拭子样品需尽快低温送至实验室检测，检测前加入适量PBS（以能见管内有液体为准），使用震荡仪震荡5分钟，12000rpm/min离心5分钟后取上清提取核酸。
3 纱布样品
3.1适用对象
适用于对人员、车辆、栏位、风机、物资、食材、小范围地面、疫苗、兽药等不规则物体及环境表面采样。
3.2采样材料
采样纱布、PE手套、自封袋、离心管、记号笔、一次性乳胶手套。
3.3样品采集
戴一次性乳胶手套后，取出干纱布（采集湿润表面）或者浸润的纱布（采集干燥表面），对采样对象进行全覆盖采样（10cm×10cm）。将采集后的采样纱布放入自封袋中标记样品信息。
3.4检测
冷藏保存并迅速运输至实验室检测，如自封袋中液体过少，再加入适量核酸保护液，以出现少量液体为准。隔着自封袋反复揉搓袋内的采样纱布，直至均匀，挤出洗脱液并转移至1.5ml离心管内，取上清提取核酸。
4 尾根血拭子样品
4.1 适用对象
限位栏母猪、公猪、发病或死亡的保育猪、育肥猪单独采样，小号棉签或植绒拭子（长度8cm 即可）。
4.2 采样材料（采样数量N）
根据采样计划准备足量的一次性针头、棉签、2ml EP管N个、记号笔、隔离服、鞋套、一次性乳胶手套一副、一次性PE手套若干。
4.3 样品采集
戴上一副乳胶手套，外面套上一层PE手套，取出消毒后的一次性针头、干净的棉签准备采样。
站在猪后方，将猪尾巴向上掀起，从肛门处起沿着猪尾巴向下约2至5cm处，在尾根内侧中线，对其表面酒精消毒后用干棉花擦干酒精（否则不易止血）。随后将一次性针头垂直尾巴穿刺0.5-2cm（根据猪个体大小），挤出血液，立即用干棉签蘸取血液，保证肉眼可见一半的棉签粘上血液。立刻打开干净无菌的2ml EP管（或者10ml EP管），将拭子头部插入管中，折断棉签柄并立刻盖上管盖并标记，使用止血喷雾对采血处消毒并止血。换外层PE手套后采集下一头猪，避免交叉污染。
尾根血进针位置
4.4 检测
拭子样品需尽快低温送至实验室检测，检测前加入适量PBS（以能见管内有液体为准），使用震荡仪震荡5分钟，12000rpm/min离心5分钟后取上清提取核酸。
