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如何科学有效的采集猪群健康监测样品?答案来了

华中农业大学动物疫病诊断中心 2022-09-22

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在非洲猪瘟防控常态化大背景下,猪场中各种疾病的监测尤为重要。在猪群健康监测中,除了选择稳定性好、敏感性高、特异性强的检测试剂与检测方法以外,一线的样品采集技术也同样决定了检测结果能否反应真实状态。

非洲猪瘟防控常态化大背景下,猪场中各种疾病的监测尤为重要。在猪群健康监测中,除了选择稳定性好、敏感性高、特异性强的检测试剂与检测方法以外,一线的样品采集技术也同样决定了检测结果能否反应真实状态。

 

本文介绍了几种主要的无创或微创采样的方法,以及如何使用相应采样工具和操作程序。包括棉绳(口腔液)、棉签/植绒拭子(鼻拭子、肛门拭子、尾根血拭子)、纱布(环境表面),棉签和纱布的采样原则为“干的采湿的、湿的采干的”。

 

1 口腔液样品

 

1.1 适用对象

 

各阶段猪群皆适用,其中保育猪使用棉绳直径1cm;育肥、母猪、大栏后备等中大猪使用棉绳直径2cm。

 

1.2采样材料(采样数量N)

 

10mlEP管N只,1m长棉绳N+根(大栏采样多点悬挂3-5根棉绳),一次性PE手套3×N只(1只收集样品使用)、记号笔、隔离服、鞋套、一次性乳胶手套多副。每份样品的材料单独包装。

 

采样前清点准备耗材

采样前清点准备耗材

 

1.3采样时间

 

建议在早晨猪饲喂之前,若是自由采食,前一天晚上关闭料筒。采样前需断水半小时,大型栋舍内分区域、时段断水,母猪断水不超过2小时。

 

1.4采样方法

 

采样前戴一次手套,打开套装包装,将棉绳悬挂在栏内干净的区域内,并远离水槽、饲料槽;将绳股松开采样;调节棉绳至猪肩高度;将绳子系牢,栏内啃咬放置20-30分钟。

 

棉绳悬挂方式和角度

棉绳悬挂方式和角度

 

1.5唾液收集

 

戴一次性手套,将被啃咬的部分棉绳放入一次性PE手套中,捏紧拉扯棉绳,将口腔液挤入手套中;将所有口腔液收集到手套的一个手指处,揪下手指套后倒入离心管,做好标记。每收集一次棉绳,更换一次性PE手套,注意防止交叉污染,如污染到乳胶手套,需及时更换。注意:棉绳唾液收集过程要务必注意交叉污染的问题,建议两人合作。

 

1.6检测

 

口腔液样品收集后需及时检测,检测前先12000rpm/min离心5分钟去除口腔液中的杂质后,使用上清提取核酸检测。

 

2 口、鼻拭子及肛门拭子样品

 

2.1 适用对象

 

限位栏母猪、公猪、发病或死亡的保育猪、育肥猪的无伤口单独采样,大猪使用大号棉签或者植绒拭子(长度15cm – 20cm),保育猪使用小号棉签或植绒拭子(长度8cm – 15cm)。

 

2.2采样材料(采样数量N)

 

根据采样计划准备足量的合适规格棉签或植绒拭子(优先选用植绒拭子)、2ml EP管N只(小棉签)或10ml EP管N只(大棉签)、记号笔、隔离服、鞋套、一次性乳胶手套一副、一次性PE手套若干。

 

2.3 样品采集

 

戴上一副乳胶手套,外面套上一层PE手套,取出干净的棉签准备采样,采集口、鼻、肛门拭子请勿将棉签沾湿,根据应激大小,按照肛门拭子、口腔拭子最后采集鼻拭子。

 

口腔拭子:对于活猪,轻柔地靠近猪只后将棉签伸入猪的口腔,在牙龈和猪唇之间来回刮擦,收集唾液,要求棉签完全湿润为止;对于死猪,将棉签在死猪口腔内反复刮擦,覆盖整个口腔,棉签表面须可见脱落的粘膜。

 

肛门拭子:对于活猪,采集肛门拭子时站在猪身后,尽量避免接触猪,在猪尾翘起时迅速找到肛门,轻柔的将拭子插入到肛门内约深入3~5cm,拭子要尽量的沿着直肠壁刮擦,尽可能采集到粪便和直肠粘膜;对于死猪则同样要求可见粪或粘膜。

 

鼻拭子:采集活猪鼻拭子时轻柔靠近猪只,在其安静时将拭子对准鼻孔,角度向外、向下方成45度角方向迅速伸入猪鼻腔中,若鼻液较少则多采集几次。如果猪只过于敏感,则使用消毒后的锁口器保定后完成采样,小猪的鼻拭子可以由饲养员抱起小猪固定头部后采集。对于鼻液较少的死猪,按上述方向将拭子伸入鼻腔并刮取粘膜。

 

图片

保育猪鼻拭子采样的角度和深度

 

2.4 拭子样品收集

 

拭子样品在采集后应立刻打开干净无菌的2ml EP管(或者10ml EP管),将拭子头部插入管中,折断棉签柄并立刻盖上管盖并标记,换外层PE手套后采集下一头猪,避免交叉污染。

 

2.5检测

 

拭子样品需尽快低温送至实验室检测,检测前加入适量PBS(以能见管内有液体为准),使用震荡仪震荡5分钟,12000rpm/min离心5分钟后取上清提取核酸。

 

3 纱布样品

 

3.1适用对象

 

适用于对人员、车辆、栏位、风机、物资、食材、小范围地面、疫苗、兽药等不规则物体及环境表面采样。

 

3.2采样材料

 

采样纱布、PE手套、自封袋、离心管、记号笔、一次性乳胶手套。

 

3.3样品采集

 

戴一次性乳胶手套后,取出干纱布(采集湿润表面)或者浸润的纱布(采集干燥表面),对采样对象进行全覆盖采样(10cm×10cm)。将采集后的采样纱布放入自封袋中标记样品信息。

 

3.4检测

 

冷藏保存并迅速运输至实验室检测,如自封袋中液体过少,再加入适量核酸保护液,以出现少量液体为准。隔着自封袋反复揉搓袋内的采样纱布,直至均匀,挤出洗脱液并转移至1.5ml离心管内,取上清提取核酸。

 

4 尾根血拭子样品

 

4.1 适用对象

 

限位栏母猪、公猪、发病或死亡的保育猪、育肥猪单独采样,小号棉签或植绒拭子(长度8cm 即可)。

 

4.2 采样材料(采样数量N)

 

根据采样计划准备足量的一次性针头、棉签、2ml EP管N个、记号笔、隔离服、鞋套、一次性乳胶手套一副、一次性PE手套若干。

 

4.3 样品采集

 

戴上一副乳胶手套,外面套上一层PE手套,取出消毒后的一次性针头、干净的棉签准备采样。

 

站在猪后方,将猪尾巴向上掀起,从肛门处起沿着猪尾巴向下约2至5cm处,在尾根内侧中线,对其表面酒精消毒后用干棉花擦干酒精(否则不易止血)。随后将一次性针头垂直尾巴穿刺0.5-2cm(根据猪个体大小),挤出血液,立即用干棉签蘸取血液,保证肉眼可见一半的棉签粘上血液。立刻打开干净无菌的2ml EP管(或者10ml EP管),将拭子头部插入管中,折断棉签柄并立刻盖上管盖并标记,使用止血喷雾对采血处消毒并止血。换外层PE手套后采集下一头猪,避免交叉污染。

 

图片

尾根血进针位置

 

4.4 检测

 

拭子样品需尽快低温送至实验室检测,检测前加入适量PBS(以能见管内有液体为准),使用震荡仪震荡5分钟,12000rpm/min离心5分钟后取上清提取核酸。

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