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ATP生物荧光法应用于猪场终末消毒效果评价:操作简便、仪器小巧、可现场读数!

湖南五指峰 2022-11-24

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三磷酸腺苷(ATP)是所有生命体(如植物、动物、微生物)细胞中基本的能量来源,利用生物荧光法检测ATP可以间接反映生命体的存在,如微生物等。自ATP检测引入国内卫生行业后,获得迅速发展。

三磷酸腺苷(ATP)是所有生命体(如植物、动物、微生物)细胞中基本的能量来源,利用生物荧光法检测ATP可以间接反映生命体的存在,如微生物等。自ATP检测引入国内卫生行业后,获得迅速发展。目前,国外较多采用ATP生物荧光法判定医疗机构环境清洁度,而国内多采用该法判断医疗器械清洗消毒效果。

 

检测结果

 

2019年,农业农村部发布《关于加强屠宰环节非洲猪瘟检测的通知》,通过自然菌或指示微生物对物体表面消毒进行效果评价,需要在二级生物安全柜内对细菌菌落进行处理、培养及计数操作,对检测环境和人员都有一定的要求,并且最短需要48h的细菌培养时间。本试验拟在猪场引入ATP生物荧光检测法,猪舍环境物体表面消毒方法进行效果评价,将其作为自然菌法和指示微生物载体法的补充,以期应用在试验条件有限时或应急状况下,在消毒完成时即对消毒效果进行预评价。

 

1. 材料与方法

 

1.1 仪器和试剂

 

检测仪器和试剂包括ATP快速荧光检测仪(云唐智能科技有限公司,山东)及配套的含荧光素酶等相关试剂检测棒,以及胰蛋白胨琼脂培养基(环凯,广东)、含1%甘氨酸+3%吐温-80的D/E肉汤(环凯,广东)。消毒剂用复方戊二醛溶液(含戊二醛15%,苯扎氯铵10%,湖南五指峰生化有限公司生产,批号20220802),按1:150倍兑水稀释,备用。

 

复方戊二醛溶液

 

1.2 消毒方法

 

选择两间刚空栏的清洗1h后的猪栏舍,面积均为约70m2,分别进行喷洒消毒和擦拭消毒。喷洒消毒方法:用常量喷雾器将稀释后的消毒剂对物体表面进行喷洒消毒,用量为100~300mL/m2,作用30min。擦拭消毒方法:用干抹布浸泡在稀释后的消毒剂中完全润湿后,拧干,对物体表面进行擦拭消毒。

 

1.3 试验方法

 

1.3.1 ATP法现场采样检测

 

按说明书操作,在试验对象消毒前后分别用ATP采样拭子进行涂抹采样(面积>100cm2的采样100cm2,面积<100cm2的则全面积采样),将拭子在采样管内折断并使荧光素酶液充分浸湿拭子头后,将采样管插入手持式ATP生物荧光检测仪进行现场读数,1min内读取数据,结果单位为相对发光单位值(RLU)。

 

1.3.2 细菌培养法检测

 

在ATP采样拭子采样时,用浸有中和剂的无菌棉拭子对同部位同时涂抹采样,将采样棉拭子无菌操作折入装有10mL中和剂的无菌试管中,立即送实验室进行活菌计数培养,结果单位为cfu/m2。

 

2. 结果

 

2.1 ATP法和自然菌法检测擦拭消毒对环境表面消毒效果的比较

 

擦拭消毒后,使用ATP法检测环境表面消毒效果,RLU平均下降率为95.7%;使用自然菌法检测环境表面消毒效果,菌落总数平均下降率为96.6%。经统计学分析,两种检测方法比较差异无统计学意义(Z=-1.730,P=0.084),认为两种检测方法检测擦拭消毒效果下降率无显著差异(表1)。

 

 ATP法和自然菌法检测擦拭消毒对环境表面消毒效果的比较

 

2.2 ATP法和自然菌法检测喷洒消毒对环境表面消毒效果的比较

 

喷洒消毒后,使用ATP法检测环境表面消毒效果,RLU平均下降率为72.8%;使用自然菌法检测环境表面消毒效果,菌落总数平均下降率96.2%。经统计学分析,两种检测方法比较差异有统计学意义(Z=-3.623,P<0.05)(表2)。

 

ATP法和自然菌法检测喷洒消毒对环境表面消毒效果的比较

 

3. 结论与分析

 

3.1 结论

 

湖南五指峰生化有限公司生产的复方戊二醛溶液按1:150倍稀释,擦拭消毒后,使用ATP法检测环境表面消毒效果,RLU平均下降率为95.7%;使用自然菌法检测环境表面消毒效果,菌落总数平均下降率为96.6%。

 

湖南五指峰生化有限公司生产的复方戊二醛溶液按1:150倍稀释,喷洒消毒后,使用ATP法检测环境表面消毒效果,RLU平均下降率为72.8%;使用自然菌法检测环境表面消毒效果,菌落总数平均下降率96.2%。

 

3.2 分析

 

依据农业部《兽用消毒剂鉴定技术规范》(试行),单个样本杀灭率≥90%的判定该样本消毒合格。试验表明:按《规范》执行的自然菌法检测,湖南五指峰生化有限公司生产的复方戊二醛溶液按1:150倍稀释,擦拭消毒对自然菌表面消毒杀菌率96.6%,喷洒消毒对自然菌表面消毒杀菌率96.2%,符合要求。

 

ATP生物荧光法用于消毒效果评价,操作简便、仪器小巧、可现场读数,相较于自然菌法明显缩短了检测时间,推荐用于紧急情况对消毒效果进行预评估,并且仅推荐用于擦拭消毒效果评估。


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