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三磷酸腺苷（ATP）是所有生命体（如植物、动物、微生物）细胞中基本的能量来源，利用生物荧光法检测ATP可以间接反映生命体的存在，如微生物等。自ATP检测引入国内卫生行业后，获得迅速发展。目前，国外较多采用ATP生物荧光法判定医疗机构环境清洁度，而国内多采用该法判断医疗器械清洗消毒效果。
2019年，农业农村部发布《关于加强屠宰环节非洲猪瘟检测的通知》，通过自然菌或指示微生物对物体表面消毒进行效果评价，需要在二级生物安全柜内对细菌菌落进行处理、培养及计数操作，对检测环境和人员都有一定的要求，并且最短需要48ｈ的细菌培养时间。本试验拟在猪场引入ATP生物荧光检测法，猪舍环境物体表面消毒方法进行效果评价，将其作为自然菌法和指示微生物载体法的补充，以期应用在试验条件有限时或应急状况下，在消毒完成时即对消毒效果进行预评价。
1. 材料与方法
1.1 仪器和试剂
检测仪器和试剂包括ATP快速荧光检测仪（云唐智能科技有限公司，山东）及配套的含荧光素酶等相关试剂检测棒，以及胰蛋白胨琼脂培养基（环凯，广东）、含1%甘氨酸+3%吐温-80的D/E肉汤（环凯，广东）。消毒剂用复方戊二醛溶液（含戊二醛15%，苯扎氯铵10%，湖南五指峰生化有限公司生产，批号20220802），按1：150倍兑水稀释，备用。
1.2 消毒方法
选择两间刚空栏的清洗1h后的猪栏舍，面积均为约70m2，分别进行喷洒消毒和擦拭消毒。喷洒消毒方法：用常量喷雾器将稀释后的消毒剂对物体表面进行喷洒消毒，用量为100~300mL/m2，作用30min。擦拭消毒方法：用干抹布浸泡在稀释后的消毒剂中完全润湿后，拧干，对物体表面进行擦拭消毒。
1.3 试验方法
1.3.1 ATP法现场采样检测
按说明书操作，在试验对象消毒前后分别用ATP采样拭子进行涂抹采样（面积＞100cm2的采样100cm2，面积＜100cm2的则全面积采样），将拭子在采样管内折断并使荧光素酶液充分浸湿拭子头后，将采样管插入手持式ATP生物荧光检测仪进行现场读数，1min内读取数据，结果单位为相对发光单位值（RLU）。
1.3.2 细菌培养法检测
在ATP采样拭子采样时，用浸有中和剂的无菌棉拭子对同部位同时涂抹采样，将采样棉拭子无菌操作折入装有10mL中和剂的无菌试管中，立即送实验室进行活菌计数培养，结果单位为cfu/m2。
2. 结果
2.1 ATP法和自然菌法检测擦拭消毒对环境表面消毒效果的比较
擦拭消毒后，使用ATP法检测环境表面消毒效果，RLU平均下降率为95.7%；使用自然菌法检测环境表面消毒效果，菌落总数平均下降率为96.6%。经统计学分析，两种检测方法比较差异无统计学意义（Z=-1.730，P=0.084），认为两种检测方法检测擦拭消毒效果下降率无显著差异（表1）。
2.2 ATP法和自然菌法检测喷洒消毒对环境表面消毒效果的比较
喷洒消毒后，使用ATP法检测环境表面消毒效果，RLU平均下降率为72.8%；使用自然菌法检测环境表面消毒效果，菌落总数平均下降率96.2%。经统计学分析，两种检测方法比较差异有统计学意义（Z=-3.623，P＜0.05）（表2）。
3. 结论与分析
3.1 结论
湖南五指峰生化有限公司生产的复方戊二醛溶液按1：150倍稀释，擦拭消毒后，使用ATP法检测环境表面消毒效果，RLU平均下降率为95.7%；使用自然菌法检测环境表面消毒效果，菌落总数平均下降率为96.6%。
湖南五指峰生化有限公司生产的复方戊二醛溶液按1：150倍稀释，喷洒消毒后，使用ATP法检测环境表面消毒效果，RLU平均下降率为72.8%；使用自然菌法检测环境表面消毒效果，菌落总数平均下降率96.2%。
3.2 分析
依据农业部《兽用消毒剂鉴定技术规范》(试行)，单个样本杀灭率≥90%的判定该样本消毒合格。试验表明：按《规范》执行的自然菌法检测，湖南五指峰生化有限公司生产的复方戊二醛溶液按1：150倍稀释，擦拭消毒对自然菌表面消毒杀菌率96.6%，喷洒消毒对自然菌表面消毒杀菌率96.2%，符合要求。
ATP生物荧光法用于消毒效果评价，操作简便、仪器小巧、可现场读数，相较于自然菌法明显缩短了检测时间，推荐用于紧急情况对消毒效果进行预评估，并且仅推荐用于擦拭消毒效果评估。
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