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非洲猪瘟病毒在运输途中会增殖?这样的差异正常吗?

曲博士猪群健康管理 2021-12-07

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运输途中样品中的病毒肯定不能增殖,这是最基本的专业常识。病毒的繁殖复制需要在宿主体内,若病毒在体外增殖培养,需要有培养细胞系,且需要在适宜的温度环境下,运输过程中没有培养细胞系,温度也相对较低,病毒不会发生增殖。

各位养猪产业链的同行们,大家好!

 

近两天接到三位养猪同行好友的电话,共同描述了下面的一个情形,可能临床实践中大家也曾遇到,于是做下整理分享。某猪场采集的两份病猪样品(同一个猪场的同一头猪同一部位),一份在本地实验室进行检测,一份邮寄到位于1000公里外的某实验室X(样品快递经历了36个小时),分别进行非洲猪瘟病毒核酸检测,猪场本地实验室检测结果CT值是38,X实验室检测结果CT值是32,CT值相差6个,请问:非洲猪瘟病毒在运输途中会增殖?这样的差异正常吗?

 

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运输途中样品中的病毒肯定不能增殖,这是最基本的专业常识。病毒的繁殖复制需要在宿主体内,若病毒在体外增殖培养,需要有培养细胞系,且需要在适宜的温度环境下,运输过程中没有培养细胞系,温度也相对较低,病毒不会发生增殖。相反,在运输过程中,因为环境温度的变化,会导致部分病毒发生死亡,病毒核酸发生降解,因此,一般情况下,X实验室检测的CT值要略低于本地化实验室。所以在长途运输中,尤其南方炎热的夏季,我们建议在采集样品中添加核酸保护与灭活剂(维特康公司有经过验证的核酸保护液出售),一方面:灭活病毒,降低样品外溢造成的生物安全风险,第二:保护病毒核酸不被降解,提高检出率。

 

那为何两个实验室之间的检测结果会差异如此显著呢?分析原因如下:影响非瘟检测结果的常见因素包括:PCR仪、核酸提取设备与试剂、人员操作、运输过程中样品的保护、样品处理质量、非洲猪瘟检测试剂盒等6个不同的因素。笔者曾测试过:1)qPCR仪器差异:不同品牌PCR设备之间检测的CT值可以差异1-3个之间。2)检测试剂:目前非洲猪瘟检测试剂,对同一份样品检测会有1-5个CT值的差别。3)核酸提取试剂的差异化。目前不同品牌的核酸提取试剂对同一份样品的提取效率的差别也会导致CT值差别0-3个之间,有的差别更大。4)人员操作:不同熟练程度人员操作对结果也会有影响。5)运输过程中样品核酸的降解,与样品的保存条件、运输的距离等因素有关。上述几个因素若进行叠加,不同实验室对同一份样品检测结果差别3-6个CT值也是非常正常的。

 

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众所周知,目前非洲猪瘟病毒变异,检测难度变大,感染的潜伏期变长。临床兽医们在想尽办法通过增加样品种类(血液、口鼻拭子等)、增加样品量(减少合并检测样品数量)、加大采样的频率与广度、提升实验室检测敏感度等途径增加变异毒株的检出率,从而做到早发现、早移除。

 

那如何知道自己实验室对样品检测的准确程度呢?

 

(1)不同实验室对同一组样品进行盲检,对比数据差异。

 

(2)对阳性样品值进行分析,一般同一试剂盒的阳性对照值是稳定的,甚至同一批号的阳性对照值都比较稳定,根据每次阳性对照的CT值差异,作为判断实验室检测准确度的参考。

 

(3)采用标准品对各实验室的检测能力进行测试,评估不同实验室对阳性样品的最低检测限、及检测的准确性。无标准品,可留存一份阳性样品,用于常规实验对照,但切忌阳性样品要做好灭活处理。

 

南京博维特健康管理公司下属的维特康检测实验室,提供实验室检测技术培训、实验室运维审计、实验室检测能力评估等多种服务,让我们一起努力,提升实验室检测的敏感性、特异性,减少检测过程中造成的核酸污染,为非洲猪瘟的早期发现做出努力。

 

非洲猪瘟成功处置的两个重点:(1)早期发现;(2)安全、无交叉污染的移除。早期发现依靠的是:临床巡视、正确的样品采集、检测实验室的检测能力。

 

加油吧,临床兽医与实验室检测同行们!

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